临床研究目的:探讨从脾论治功能性腹泻的临床疗效及对功能性腹泻患者生活质量及相关影响因素的改善作用。材料与方法:招募60例西医诊断为功能性腹泻、中医诊断为脾虚湿盛、脾肾阳虚的泄泻患者,随机分成观察组和对照组,观察组采用健脾利湿、补脾益肾中药加减治疗,对照组给予外观一致的安慰剂治疗,疗程4周,停药后观察4周,进行相关记录。记录治疗前、治疗后2周、4周、停药后4周腹泻次数、Bristol粪便性状量表积分、总体印象量表积分、中医症状积分、医院焦虑与抑郁量表(HAD)积分、SF-36生活质量量积分,并进行相关统计分析。结果:1、两组治疗前、后腹泻次数比较:与治疗前比较,观察组治疗2周、4周及停药4周后均有显著性差异(P<0.01);对照组治疗2周后与治疗前比较无显著性差异(P>0.05),治疗4周、停药4周后与治疗前比较均有显著性差异(P<0.05)。观察组与对照组在治疗2周、4周、停药4周后比较均有显著性差异(P<0.05)。2、两组治疗前后Bristol粪便性状量表积分比较:与治疗前比较,观察组治疗2周、4周后均有显著性差异(P<0.05),停药4周后有极显著性差异(P<0.01);对照组治疗前后均无显著性差异(P>0.05)。观察组与对照组两组Bristol粪便性状量表积分在治疗2周后无显著性差异(P>0.05),在治疗后4周、停药后4周均有显著性差异(P<0.05)。3、两组中医症状总积分比较:与治疗前比较,观察组治疗4周后与对照组均能降低中医症状总积分,观察组与治疗前比较有显著性差异(P<0.05),对照组与治疗前比较无显著性差异(P>0.05)。治疗4周后观察组与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。4、两组中医各症状积分比较:与治疗前比较,观察组治疗4周后在胃脘痞满、气短、畏寒怕冷三个症状有显著性差异(P<0.05);在纳呆、口吐清涎、四肢乏力、全身困重、大便稀溏五个症状有极显著性差异(P<0.01)。与治疗前比较,对照组治疗4周后在胃脘痞满、全身困重、大便稀溏三个症状有显著性差异(P<0.05)。观察组与对照组治疗4周后在胃脘痞满、气短、畏寒怕冷、纳呆、口吐清涎、四肢乏力、全身困重、大便稀溏积分比较有显著性差异(p<0.05)。5、两组治疗前后总体印象量表(cgis)积分比较:与治疗前相比,观察组与对照组治疗4周后总体印象量表积分均有增加,观察组与治疗前比较有极显著性差异(p<0.01),对照组与治疗前比较无显著性差异(p>0.05)。治疗后4周后两组比较有极显著性差异(p<0.01)。6、两组治疗前后医院焦虑与抑郁量表(had)积分比较:与治疗前相比,治疗4周后,观察组与对照组均能降焦虑积分、抑郁积分,既hada/hadd积分。hadd积分组内、组间比较,治疗前、后比较均无显著性差异(p>0.05)。hada积分观察组、对照组与治疗前比较均有显著性差异(p<0.05)。治疗4周后观察组与对照组比较亦有显著性差异(p<0.05)。7、两组治疗前后sf-36积分及总积分比较:与治疗前相比,观察组治疗4周后在情感职能(re)、一般健康状况(gh)、精神健康(mh)、社会功能(sf)、精力(vt)五个维度有显著性差异(p<0.05)。而对照组在上述五个维度积分有所改善,但与治疗前相比仅在情感职能(re)、精神健康(mh)两方面有显著性差异(p<0.05),余无显著性差异(p>0.05)。两组患者治疗4周后在一般健康状况(gh)、精神健康(mh)社会功能(sf)、精力(vt)四个维度积分改善有显著性差异(p<0.05)。观察组治疗4周后在心理维度、生活质量总评分与对照组相比均有显著性差异(p<0.05)。结论:1、中药从脾论治能够减少功能性腹泻患者腹泻次数,且作用持久,与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。2、中药从脾论治能够减少功能性腹泻患者bristol粪便性状量表积分,改善粪便性状,且作用持久,与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。3、中药从脾论治能够改善功能性腹泻患者胃脘痞满、气短、畏寒怕冷、纳呆、口吐清涎、四肢乏力、全身困重、大便稀溏等症状,能够降低功能性腹泻患者中医症状总积分。安慰剂仅在胃脘痞满、全身困重、大便稀溏三个症状有明显改善(p<0.05)。二者相比较有显著性差异(p<0.05)。4、中药从脾论治与安慰剂均能增加总体印象量表积分,中药组优于安慰剂组(p<0.05)。5、中药从脾论治与安慰剂均能降低焦虑、抑郁积分,以降低焦虑积分为优(p<0.05),中药组优于安慰剂组。6、中药从脾论治能够提高功能性腹泻患者SF-36积分,以观察组为优(P<0.05)。在心理维度、生活质量总评分均优于对照组(P<0.05)。7病程、焦虑、症候能够影响功能性腹泻患者心理健康及生活质量,且以焦虑影响为首。而女性、病程大于5年、焦虑、中医症候积分能够影响生理健康,其中病程影响较大。实验研究目的:基于功能性腹泻脾虚证模型大鼠肠黏膜紧密连接蛋白及细胞因子的变化,探讨功能性腹泻的发病机理以及参苓白术散治疗功能性腹泻的疗效机理,为从脾论治功能性疾病提供实验依据。材料与方法:本研究采用高乳糖+小平台站立法建立功能性腹泻脾虚证大鼠模型,采用三个剂量组的参苓白术散加减作为从脾论治的实验因素,匹维溴铵作为阳性对照药,以肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin及肠黏膜细胞因子SIg A、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10为效应指标,进行临床实验。75只Wistar大鼠采用高乳糖+小平台站立法造模14天,造模成功60只大鼠按体重随机分为五组:模型组、匹维溴铵组、参苓白术散高、中、低剂量组,每组12只,正常组15只。随后各组给予相应药物干预,正常组和模型组给予生理盐水,共14天。实验期间,每天观察大鼠粪便性状、一般状态、食量及体重变化。取材后采用RT-PCR、Westernblot、免疫组化法检测结肠黏膜ZO-1、Claudin-1、Occludinm RNA及蛋白表达,ELISA法检测结肠粘膜TNF-α,IFN-γ、SIg A、IL-4、IL-10表达。结果:1、一般状态观察:正常组大鼠实验全程无粪便性状改变,精神状态良好。造模组大鼠次日开始出现大便时溏时软,含水量增加,直至水样便,伴有精神萎靡。用药14天后,除低剂量组外各组大鼠均有不同程度改善,匹维溴铵组和高剂量组恢复最好,大鼠精神状态良好,大便成深褐色颗粒状;中剂量组大鼠稍差,精神状态尚可,大便呈深褐色,较成型,个别稍软。低剂量组各方面无明显恢复,仍然稀便。2、各组大鼠进食量比较:造模后与正常组比较大鼠进食量明显减少(P<0.01),用药14天后与模型组比较,除低剂量组外各组大鼠均有不同程度改善(P<0.05),但各组与正常组比较仍有显著性差异(P<0.05)。3、各组大鼠体重比较:造模后与正常组比较大鼠体重显著减轻(P<0.01),用药14天后与模型组比较各组大鼠体重均有所增加,匹维溴铵组、参苓白术散高剂量组有显著性差异(P<0.05);参苓白术散中、低剂量组体重有所增加,但无显著性差异(P>0.05)。但各组与正常组比较仍有显著性差异(P<0.05)。4、腹泻率及平均大便积分:造模期间腹泻率为l OO%。造模后与正常组比较,模型大鼠大便积分有明显差异(P<0.01)。用药14天后参苓白术散高、中剂量组、匹维溴铵组积分均降低,与正常组比较均无明显差异(P>0.05),而低剂量组、模型组仍有显著性差异(P<0.05)。5、结肠组织病理切片HE染色显微形态结构:正常组粘膜层上皮细胞排列整齐,大量吸收细胞与杯状细胞,粘膜下层可见小动脉、静脉及淋巴管,肌层薄厚均匀无异常改变。模型组结肠粘膜层可见浸润的炎性细胞,杯状细胞基本消失,粘膜水肿、上皮脱落,粘膜下层小动脉、静脉及淋巴管萎缩,肌层薄厚不均匀,形态、结构被破坏。匹维溴铵组与参苓白术散高、中剂量组结肠粘膜形态有所恢复,可见粘膜层单层柱状上皮细胞、杯状细胞,粘膜下层仍可见少量浸润的炎性细胞,中剂量组粘膜肌层薄厚仍稍显不均匀、排列较紊乱。低剂量组无明显恢复。6、各组血清中DAO含量:与正常组比较,模型组血清DAO含量明显升高(P<0.01);用药14天后与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高剂量组血清DAO含量明显降低(P<0.01);中、低剂量组血清DAO含量均无降低趋势(P>0.05)。7、各组大鼠结肠组织ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA表达:正常大鼠结肠组织可检测到ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA表达。与正常组比较,模型组大鼠结肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA表达明显下调(P<0.01);用药14天后,与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高剂量组均明显上调ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA表达(P<0.01);参苓白术散中、低剂量组可以上调ZO-1、Occludinm RNA表达,但无显著性差异(P>0.05)8、westernblot法检测各组大鼠结肠组织ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达:正常大鼠结肠组织可检测到紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin蛋白表达。与正常组比较,模型组大鼠结肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达明显下调(P<0.05);Claudin-1有下调趋势,但无显著性差异(P>0.05);与模型组比较,匹维溴铵组及参苓白术散高、中剂量组能明显上调ZO-1蛋白表达(P<0.05);匹维溴铵组明显上调Occludin蛋白表达(P<0.05),参苓白术散高剂量组有上调趋势,但无显著性差异。9、免疫组化法检测各组大鼠结肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达:正常组光镜下可见到ZO-1、Occludin蛋白均匀一致地连续分布于小肠上皮细胞的边缘。模型组各时间点的ZO-1、Occludin蛋白分布不均,表达明显减少或缺失。与正常组相比,模型组ZO-1、Occludin阳性率均有明显差异(P<0.05)。与模型组相比匹维溴铵组、参苓白术散高剂量组均能使ZO-1表达率增加(P<0.05)、匹维溴铵组、参苓白术散高、中、低剂量组均能使Occludin表达率增加(P<0.05)。10、ELLSA法检测大鼠结肠黏膜TNF-α、IFN-γ、SIg A、IL-4、IL-10表达:正常大鼠肠粘膜可检测到TNF-α、IFN-γ、SIg A、IL-4、IL-10表达。(1)与正常组比较,模型组肠黏膜TNF-α含量明显升高(P<0.01);与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高、中剂量组能明显降低肠黏膜TNF-α含量(P<0.05);参苓白术散低剂量组有降低趋势,但无显著性差异(P>0.05);(2)与正常组比较,模型组肠黏膜IFN-γ含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高、中剂量组能明显降低肠黏膜IFN-γ含量(P<0.05),参苓白术散低剂量组有降低趋势,但无显著性差异(P>0.05);(3)与正常组比较,模型组肠黏膜IL-4含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高剂量组能明显升高肠黏膜IL-4含量(P<0.01),参苓白术散中、低剂量组有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05);(4)与正常组比较,模型组肠黏膜IL-10含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,各用药组均能明显升高肠黏膜IL-10含量(P<0.05)(5)与正常组比较,模型组肠黏膜SIg A含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,匹维溴铵组、参苓白术散高、中剂量组能明显升高肠黏膜SIg A含量(P<0.05),参苓白术散低剂量组有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论:1、高乳糖+小平台站立可以成功复制功能性腹泻脾虚证大鼠模型,中医药从脾论治可有效治疗该病。2、正常大鼠肠粘膜存在ZO-1、Claudin-1、Occludinm RNA和蛋白表达,同时存在SIg A、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10表达。功能性腹泻脾虚证大鼠结肠组织ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA表达明显降低,ZO-1、Occludin蛋白表达降低;结肠粘膜TNF-α、IFN-γ表达明显升高、SIg A、IL-4、IL-10表达明显降低,肠黏膜紧密连接蛋白和细胞因子的变化可能是功能性腹泻脾虚证发病机制之一。4、中药从脾论治可能通过上调功能性腹泻脾虚证大鼠结肠组织ZO-1、Claudin-1、Occludin m RNA及蛋白表达;降低结肠组织TNF-α、IFN-γ表达;升高SIg A、IL-4、IL-10表达来调控肠道的机械屏障与免疫屏障而起到健脾利湿止泻作用,这可能是其治疗功能性腹泻机理之一。