目的:观察不同浓度医用臭氧对体外培养的大鼠脊髓神经元的损伤作用,并初步探讨其损伤机制。方法:从孕14天Wistar大鼠胚胎组织中获取脊髓神经元,体外培养至第6～7天,免疫荧光化学方法行细胞纯度鉴定。将鉴定后的脊髓神经元分成5组,分别为对照组、氧气组、20μg/mL、40μg/mL和60μg/mL臭氧组。利用真空泵将胶塞密封好的培养瓶内压力降至-0.6kPa,除对照组外,其余各组注入浓度分别为20,40和60μg/mL的医用臭氧及氧气各20mL。气体干预20分钟后,将培养瓶放回孵箱内继续孵育2.5小时。倒置相差显微镜下观察细胞形态学的变化,Hoechst33258荧光染料显示细胞核损伤,提取全细胞蛋白行生化指标及蛋白检测。选用黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD水平、硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平、简易测定法测定细胞LDH漏出率。采用Western Blot检测Bcl-2,Bax及MAP2的表达水平变化。结果:(1)细胞培养及纯度鉴定:细胞培养至第6～7天,荧光显微镜下观察MAP-2阳性神经元的纯度为87.70±8.70%;(2)光镜下细胞形态学改变:发疱细胞为最为常见也最具特色的形态学改变且随臭氧浓度升高,神经元突起扭曲断裂,表现为串珠样改变;(3)Hoechst33258示DNA形态学变化:对照组细胞为均匀一致的淡蓝色;氧气组神经元细胞核DNA出现断裂、边集;臭氧干预组神经元染色质浓缩发亮且呈剂量相关;(4)生化指标检查:SOD,MDA及LDH的测定值均随着臭氧干预浓度升高而升高,MDA与LDH升高较早(40μg/mL),且曲线斜率较之SOD更大。(5)Western Blot检测凋亡蛋白:随着臭氧干预浓度的升高,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平未见明显趋势,而凋亡蛋白Bax的表达水平却有稳定的上升。神经元微管相关蛋白2的表达水平随着臭氧干预浓度的升高而不断下降。结论:医用臭氧对于体外培养的脊髓神经元具有细胞毒作用,在较低干预浓度下(20μg/mL),脊髓神经元表现出非常明显的损伤变化,损伤程度随着臭氧浓度的升高而加重。细胞凋亡及坏死机制均参与了神经元氧化损伤的过程。