【摘 要】
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该实验室的前期工作用正常成人肾组织mRNA为材料,结合新近发展的SMART PCR及5RACE技术找到了Lmo2基因的一种新的5剪接模式,克隆到此剪接模式的全长cDNA并进行序列分析,发现这
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该实验室的前期工作用正常成人肾组织mRNA为材料,结合新近发展的SMART PCR及5RACE技术找到了Lmo2基因的一种新的5剪接模式,克隆到此剪接模式的全长cDNA并进行序列分析,发现这个新的转录本具有与以往不同的转录起始点,编码一个151氨基酸的蛋白质,N端7个氨基酸序列与原先报道的LMO2蛋白有差异,其余则完全相同.此外,在人类基因组序列数据库中检索Lmo2基因序列,经过对原先报道的Lmo2 mRNA序列修正后,找到符合原读码框的更上游的ATG起始密码,其编码产物在一直被广泛认同的LMO2蛋白序列的N端增加了69个氨基酸.为进一步认识这两种新编码蛋白表达特征及对其潜在结合因子的研究,该论文进行了以下几个方面的工作:1.以该实验室先前构建的pGEX-Q载体为模板PCR,得到了原癌基因Lmo2最短剪接模式Lmo2-S的开放读码框(ORF),将其作为插入片断,利用基因工程方法构建到真核表达载体pcRNA/Myc-His6B中.此新构建的载体称为pcDNA/Myc-His6B-Lmo2-S.2.提取该实验室先前构建的急性T淋巴细胞白血病细胞系8511的cDNA,以其为模板PCR,得到了原癌基因Lmo2最长剪接模式Lmo2-L的开放读码框(ORF),将其作为插入片断,利用基因工程方法构建到原核表达载体pET中.此新构建的载体称为pET-Lmo2-L.3.对构建的pET-Lmo2-L原核表达系统进行诱导表达,得到了预期大小的目的蛋白.利用组氨酸与Ni<2+>离子的螯合作用亲和层析,纯化目的蛋白.
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