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孕烷X受体(PXR)作为配体依赖性转录因子,能够调节参与药物代谢和消除的细胞色素P450及转运蛋白的转录表达。由于PXR的调控特异性存在明显的物种差异,在没有研究数据的情况下,不能将哺乳动物的研究结果外推到鱼类。目前,关于药物代谢酶在斑点叉尾鮰体内/外的研究非常少,本文首先分析了PXR和细胞色素P450 3A30基因在斑点叉尾鮰体内的表达与分布,为研究PXR和CYP3A30对斑点叉尾鮰体内/外药物代谢的影响提供数据支撑。然后测定了27种天然产物单体对斑点叉尾鮰肾细胞的毒性影响,并研究了27种天然产物单体对斑点叉尾鮰肾细胞PXR、CYP3A30和MDR1基因表达以及CYP3A酶活性的影响。筛选出了能够诱导基因表达及酶活性的天然产物单体。最后进行了体外试验,研究了该天然产物单体对斑点叉尾鮰体内典型抗菌药物磺胺甲噁唑的残留消除规律的影响。1. PXR、CYP3A基因在斑点叉尾鮰体内的表达与分布首先,通过不同的途径对斑点叉尾鮰PXR和CYP3A30基因各自设计了五对引物。然后通过PCR和q-PCR技术对引物进行了评价,筛选出PXR的3号引物和CYP3A30的4号引物,其扩增效率分别为100.64%和95.16%,斜率分别为-3.307和-3.444,R~2分别为0.997和0.992。由此分析,引物PXR-3和CYP3A30-4符合实验要求(PXR-3F:GGCTGGACTCAGGCTTATTT,PXR-3R:CGAGCTGTGGTCTGTG ATTT;CYP3A-4F:GTGTTCTCTCTCCATCCTTCAC,CYP3A-4R:CTCGTCACCA CA TCCATACTG)。然后,利用q-PCR技术检测了斑点叉尾鮰各个组织中PXR和CYP3A基因的表达与分布。结果表明PXR在斑点叉尾鮰的各个组织中的表达水平由低到高依次是肌肉、肝、皮、脑、中肠、脾、前肠、心、后肠、肾、鳃;其中,在鳃、肾组织的PXR基因的m RNA表达量显著高于其他组织(P<0.05)。CYP3A30基因在斑点叉尾鮰各个组织中的表达水平由高到低依次是前肠、后肠、中肠、鳃、肝、肾、脾、皮、脑、心、肌肉;其中CYP3A30基因在前肠、中肠、后肠的表达水平显著高于其他组织(P<0.05);2.27种天然产物单体对斑点叉尾鮰肾细胞(CC-K)药物代谢相关基因及酶活的影响以斑点叉尾鮰肾细胞(CC-K)为研究对象,完成了27中天然产物单体对CC-K细胞的活性影响实验。观察并记录了对细胞的最大无作用量,使用软件分析了多种天然产物单体的的半致死浓度并作出IC50图。调查了27种天然产物对CC-K细胞中PXR、CYP3A30和MDR1基因以及CYP3A酶活的影响。结果表明,双去甲氧基姜黄素,甘草次酸,鱼藤酮,青蒿素,双氢青蒿素,蒿本内酯和苦参碱等显著诱导PXR基因表达水平。细胞经去甲氧基姜黄素,甘草次酸,青蒿素,苦参碱,黄芩素,五味子酯甲,蒿本内酯和双氢青蒿素处理后,CYP3A30与PXR基因的表达同时被诱导。此外,我们发现天然产物五味子甲素,五味子乙素,五味子醇甲和五味子醇乙显着上调了MDR1基因的的m RNA水平。这项工作为进一步的研究提供实验数据支持,例如天然产物单体在斑点叉尾鮰养殖过程中的合理使用,加速化学药物的残留消除或避免药物之间不良的相互作用。3. 青蒿素和金丝桃素对磺胺甲噁唑在斑点叉尾鮰体内代谢速率的影响在水温25±2℃的条件下,以斑点叉尾鮰作为研究对象,将磺胺甲噁唑以100mg/kg鱼体重的剂量进行单次灌胃。10 h后,实验组分别灌胃金丝桃素和青蒿素,对照组灌胃蒸馏水。结果表明,青蒿素能够显著加快磺胺甲噁唑在斑点叉尾鮰体内的残留消除,而金丝桃素表现出抑制磺胺甲噁唑在带皮肌肉中的代谢消除的趋势。因此青蒿素和金丝桃素都能对斑点叉尾鮰体内磺胺甲噁唑的残留消除规律产生影响,应该注意青蒿素和金丝桃素在和磺胺甲噁唑在水产养殖中的联合使用。