【摘 要】
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目的:（1）探讨迷迭香酸衍生物RAA9对人结肠癌HCT116细胞增殖、迁移的影响;（2）探讨RAA9是否诱导人结肠癌HCT116细胞发生自噬;（3）探讨RAA9诱导HCT116自噬发生可能的机制。方法:（1）MTT法检测RAA9对人结肠癌HCT116细胞增殖的影响;（2）划痕实验观察RAA9对HCT116细胞迁移的影响;（3）吖啶橙（AO）染色观察细胞自噬泡;（4）细胞免疫荧光观察HCT116细胞
【基金项目】
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项目名称:迷迭香酸衍生物RAD-5诱导结肠癌细胞凋亡机制的初步探究,项目合同编号:Z20180959,项目来源:广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题,项目起止时间:2018年1月至2020年12月; 项目名称:导师引导下的学术期刊论文评价学习小组教学模式提升专业型研究生科研能力的探索,项目合同编号:JGY2019052,项目来源:2019年广西学位与研究生教育改革课题,项目起止时间:
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目的:（1）探讨迷迭香酸衍生物RAA9对人结肠癌HCT116细胞增殖、迁移的影响;（2）探讨RAA9是否诱导人结肠癌HCT116细胞发生自噬;（3）探讨RAA9诱导HCT116自噬发生可能的机制。方法:（1）MTT法检测RAA9对人结肠癌HCT116细胞增殖的影响;（2）划痕实验观察RAA9对HCT116细胞迁移的影响;（3）吖啶橙（AO）染色观察细胞自噬泡;（4）细胞免疫荧光观察HCT116细胞中LC3的表达情况;（5）PCR及Western blot检测自噬相关基因及蛋白LC3、Beclin-1在不同RAA9浓度下的表达情况;（6）Western blot检测RAA9对自噬相关通路PI3K/Akt/mTOR信号通路中Raptor、AKT、P-AKT、S6K1、P-S6K1、4ebp1蛋白表达的影响。结果:（1）MTT结果显示HCT116的细胞活性随着RAA9浓度的增加而降低,对人结肠癌HCT116细胞具有增殖抑制作用（P<0.05）,并呈浓度、时间依耐性;（2）划痕实验结果显示RAA9对HCT116细胞的迁移能力有抑制作用,并呈浓度依耐性;（3）RAA9对HCT116细胞自噬的影响:吖啶橙染色结果提示RAA9可诱导HCT116细胞发生自噬,细胞内自噬泡随RAA9浓度增加而增加;免疫荧光结果提示LC3的表达随RAA9浓度的增加而增加;PCR及Western blot结果显示RAA9可上调LC3及Beclin-1的表达,对细胞自噬有促进作用;（4）Western blot结果提示RAA9能显著下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白Raptor、P-AKT、S6K1、P-S6K1、4ebp1的表达（P<0.05）。结论:（1）迷迭香酸衍生物RAA9可以明显抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖及迁移;（2）迷迭香酸衍生物RAA9可通过上调LC3、Beclin-1来诱导结直肠癌HCT116细胞发生自噬;（3）迷迭香酸衍生物RAA9诱导结肠癌HCT116细胞发生自噬可能是依赖抑制PI3K/AKT/mTOR通路活性实现的。
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