论文部分内容阅读
两千多种相关的沙门氏菌中,伤寒杆菌是重要的致病菌,它只对人致病并引起伤寒肠热症。伤寒杆菌可侵入肠道细胞,存活于巨噬细胞及树突状细胞。近年来发现的伤寒杆菌病原毒力岛上的IVB型纤毛与伤寒杆菌对人体特异性的致病性密切相关,但新发现的IVB型纤毛与人单核细胞作用的机制还不清楚。为进一步研究伤寒杆菌IVB型纤毛的功能以及研制能特异性抑制伤寒杆菌侵袭人单核细胞的抗菌多肽制剂,本实验在体外人工合成了引物和含36个随机序列的寡核苷酸,通过两轮PCR构建了随机DNA文库,随后在体外进行偶联的转录和翻译,得到含随机12肽的核糖体文库,通过构建的核糖体文库筛选到了与伤寒杆菌IVB型纤毛结构蛋白prePilS结合的12肽R(RQERSSLSKPVV)。侵袭抑制实验结果表明12肽R能抑制有纤毛的伤寒杆菌侵袭人单核细胞系THP-1,而对无纤毛的伤寒杆菌无任何作用,与12肽R大小和溶解性相同的12肽Y(作为对照多肽)对有纤毛和无纤毛的伤寒杆菌侵袭细胞均无抑制作用;等温滴定量热实验(ITC)发现12肽R与prePilS蛋白的Ka值为0.4×105L·mol-1~2.2×105L·mol-1,表明12肽R与prePilS蛋白具有高亲和力。本实验在国际上首次筛选并确定了能特异性结合伤寒杆菌IVB型纤毛的的12肽R,筛选到的12肽R具有抵抗伤寒杆菌感染人体细胞的潜力,本文数据也为进一步理解伤寒杆菌IVB型纤毛的致病机制奠定了基础。