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石蒜碱(Lycorine)大量存在于石蒜科植物中,其含有多种独特的生物活性和药理活性,具有抗炎、抗菌抗病毒以及对心血管系统、中枢神经系统的作用等药理作用。近几年,因为石蒜碱作为一种天然成分存在于自然界中,所以其抗肿瘤作用被国内外专家学者所关注,但研究成果还很片面,抗肿瘤的作用机制还不是特别明确,所以本实验对石蒜碱通过死亡受体途径诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡进行研究,为石蒜碱的抗肿瘤作用机制提供理论依据,对其进一步开发利用提供理论基础。本课题组运用Western Blotting法检测3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L的石蒜碱作用于人肝癌HepG-2细胞48h后Fas蛋白和FasL蛋白表达的变化情况。运用流式细胞仪检测不同浓度石蒜碱对人肝癌HepG-2细胞内DR5、TRAIL蛋白表达的影响。通过利用Caspase-3和Caspase-8试剂盒,采用酶标仪检测终浓度为3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L的石蒜碱作用人肝癌HepG-2细胞48h后对Caspase-3和Caspase-8活性的影响。Western Blotting法检测结果表明,给药组Fas蛋白相对表达量分别为:103.26%、108.45%、118.60%,FasL 蛋白相对表达量分别为:106.38%、132.32%、148.04%,与阴性对照组相比具有显著性(P<0.01),并且随着石蒜碱给药剂量的增加,Fas和FasL蛋白的灰度值在逐渐升高,表明其蛋白的表达量在逐步升高,呈现一定的剂量依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,给药组DR5蛋白的表达量分别为:64.60%、79.33%、91.83%,给药组TRAIL蛋白的表达量分别为:75.47%、95.90%、96.77%,DR5和TRAIL蛋白的表达量升高,与阴性对照组相比具有显著性(P<0.01),实验结果呈现一定的剂量依赖关系。酶标仪检测结果显示,给药组Caspase-3蛋白的相对活性分别为:137.22%、163.38%、207.62%,给药组 Caspase-8 蛋白的相对活性分别为:153.45%、163.92%、243.65%,与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.01),并且随着给药剂量的升高,Caspase-3和Caspase-8蛋白的相对活性增加,呈现一定的剂量依赖关系。表明石蒜碱能够增强人肝癌HepG-2细胞中Caspase-3和Caspase-8的活性。综上所述,石蒜碱诱导人肝癌HepG-2凋亡的作用机制可能是:石蒜碱上调人肝癌HepG-2细胞中Fas/FasL、DR5/TRAIL蛋白的表达,促进Caspase-8蛋白活性的增强、进而激活Caspase-3,发生一系列级联反应,诱发细胞凋亡。由此表明,石蒜碱可以通过死亡受体途径诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡。