【摘 要】
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本文建立了薄层层析法、紫外分光光度法和以0.02mol/L HCOONH4为流动相的高效液相色谱检测方法,通过对产S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)菌种Y1947的紫外线诱变,得到1株产SAM较高的菌株62
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本文建立了薄层层析法、紫外分光光度法和以0.02mol/L HCOONH4为流动相的高效液相色谱检测方法,通过对产S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)菌种Y1947的紫外线诱变,得到1株产SAM较高的菌株62#;发酵液SAM产量达到了1250mg/L。 在培养和转化过程中,分别对摇床和5L发酵罐的工艺条件进行了优化,确立了发酵培养基的最适初始pH 5.5和SAM的最适转化pH 5.0,最佳发酵温度为30℃,最适底物浓度为0.5%;研究了培养基中碳源、氮源等对合成SAM的影响,发现碳源以葡萄糖为最好,氮源选择了NH4NO3,并对培养基成分进行了单因素分析和多因素正交试验,确定的培养基组成为(g/L):酵母膏10、葡萄糖50、L-蛋氨酸5、NH4NO3 7、K2HPO4 4、KH2PO4 2、MgSO4·7H2O 0.2、MnSO4·7H2O 0.01g/L、硫酸腺嘌呤0.01、ZnCl2 0.01。 讨论了酵母细胞内积累SAM的动力学因素,论证了能量代谢在SAM生物合成中的重要性,采用了代谢溢流模型描述酵母好氧菌生长和产物合成过程,能较好地关联酵母细胞的间歇生长及产物合成的实验数据。 采用等体积乙酸乙脂与水处理酵母,进一步采用H2SO4处理,可有效控制胞内杂质释放,提高SAM的释放率。 开发了雷氏盐选择性沉淀分离SAM的新工艺,使SAM的硫酸盐得率在60%以上,硫酸对甲苯磺酸盐得率在50%以上。采用离子交换树脂分离SAM,证明离子交换法提纯SAM具有工艺简单,回收率高等优点。
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