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目的:在朝医理论指导下,以体外活性为主要依据优化朝医传统方剂“千金文武汤”的提取、精制工艺,考察分离得到的不同组分对高糖环境下体外培养正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,为将该方剂开发成为治疗糖尿病肾病的组分中药提供实验依据。方法:以总多糖、总黄酮、总皂苷的提取量为指标,通过正交实验优化“千金文武汤”的提取工艺参数,并以澄明度、稳定性及总黄酮、总多糖、总皂苷的保留量为指标采用吸附澄清法进行精制,确定精制工艺参数;利用大孔吸附树脂柱,对“千金文武汤”的有效部位进行组分分离,分离出7个组分,测定各组分中总多糖、总黄酮及总皂苷三者之间的含量比。高糖环境下体外培养HK-2细胞,加入不同给药浓度组分和总提取物,孵育24h后收集细胞上清液,采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)的含量、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力;孵育48h后以Western Blot法检测HK-2细胞的α-SMA蛋白表达情况。结果:优化后的提取工艺参数为:水煎煮法提取2次,料液比1:10、1.5h,料液比1:8、1h;优化后的吸附澄清法参数为:料液比为1:1,吸附澄清剂B组分用量为7%,吸附澄清剂A组分用量为3.5%,药液温度60℃。精制后的药液经大孔吸附树脂用不同浓度乙醇洗脱后得到7个组分,其中1～4号中总多糖、总黄酮及总皂苷含量比分别为1:0.012:0.067、1:0.098:0.072、1:1:0.238、1:0.727:0.273,第 5、6、7 号未见多糖成分;5～7 号总黄酮与总皂苷含量比分别为1:0.833、1:0.974、1:0.3。与正常组(NG)比较,渗透压对照组(MAN)的MDA含量无显著性差异,高糖组(HG)MDA的含量有所升高(P<0.05):与HG组比较,给药组的MDA含量均下降,其中1号～5号的部分给药浓度及6号、7号和8号的所有给药浓度均有显著性差异(P<0.05)。与NG组比较,MAN组的SOD活力无显著性差异,HG组SOD含量有所下降(P<0.05),除6号之外,其他给药组的SOD含量均上升,其中2号-4号部分给药浓度有极显著性差异(P<0.01)。Western Blot实验表明,NG组α-SMA蛋白微量表达,MAN组与NG组比较α-SMA蛋白表达无显著性差异,HG组与NG组相比较α-SMA蛋白表达有所升高(P<0.01);与HG组相比,给药组α-SMA蛋白表达被抑制,蛋白含量有所下降(P<0.01)。结论:“千金文武汤”的提取、精制工艺稳定、可行,分离得到的有效部位组分作用于高糖诱导的HK-2细胞后,增加了细胞的SOD活性、减少了 MDA的产生,而且可降低HK-2细胞的α-SMA的表达。提示该方剂有效部位组分,可通过抑制高糖诱导的HK-2细胞氧化应激和肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,从而改善肾纤维化,并提高肾功能。