CD137信号对CIK细胞增殖和功能调节的研究

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共刺激分子CD137是近年新发现的TNFR超家族的新成员,其主要表达在活化的T细胞、自然杀伤细胞(natural killer,NK cells)和树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面。研究发现CD137与其配体结合后,介导的共刺激信号可促进T细胞和NK细胞增殖、诱导细胞因子的分泌以及减少活化诱导的细胞死亡(activation-induced cell death,AICD),增加细胞存活能力。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinduced killer cells,CIK细胞)是一种新型的具有广谱杀瘤活性的非主要组织相容性复合物(non-major histocompatibility complex,MHC)限制性的免疫效应细胞。但目前CIK细胞的扩增效率和治疗实体瘤的疗效仍有待进一步提高。CIK细胞为一群异质细胞群,包括CD3+CD56+细胞和CD3+CD8+细胞,其中CD3+CD56+细胞是CIK细胞发挥直接和间接抗肿瘤作用最主要的效应细胞。因此通过提高CIK细胞中CD3+CD56+细胞的数量和抗肿瘤的活性可有效提高CIK细胞过继免疫治疗的疗效。然而目前CD137信号对CD3+CD56+细胞亚群的功能调节国内外未见报道。在本研究中,通过CD137mAb激活CD137共刺激信号通路,可以显著提高CIK细胞的增殖能力和杀伤活性。在此基础上,探讨CD137信号对CIK细胞功能的调节机制。本实验结果为提高CIK细胞治疗实体瘤的疗效提供新的理论依据。目的:探讨CD137信号对健康人和肺癌患者外周血来源的CIK细胞的扩增和功能调节作用。方法:分离健康人和肺癌患者外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs),实验组在常规CIK培养体系中加入cD137单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),即CD137-CIK组;对照组在常规CIK培养体系中加入鼠IgG1同型对照,即IgG1-CIK组。健康人CIK细胞:(1)苔盼蓝拒染法细胞计数分析细胞增殖;(2)LDH酶释放法检测CIK细胞对A549细胞杀伤活性;(3)AnnexinV-FITC/PI试剂盒检测CIK细胞凋亡率;(4)流式细胞术检测CIK细胞表型分布及CD3+CD56+细胞内细胞因子及其表面NK细胞受体(NK cell receptor,NKR)的表达;(5)CIK细胞和CD4+Th0细胞共培养后,流式细胞仪分析CD4+T细胞内IFN-γ和IL-4的表达水平。肺癌患者CIK细胞:(1)流式细胞术分析CIK细胞表型;(2)LDH酶释放法检测CIK细胞对A549细胞杀伤活性。结果:健康人:(1)CD137-CIK组细胞体外扩增效率显著高于IgG1-CIK组,CD137-CIK组细胞浓度最高达(9.87±0.57)×106/ml;IgG1-CIK组浓度最高为(7.02±0.68)×106/ml(p<0.05);(2)培养至28天,CD137-CIK组和IgG1-CIK组细胞中CD3+CD56+细胞比例分别达到(39.86±4.69)%和(29.14±5.12)%(p<0.05);(3)培养至14天,CD137-CIK组细胞凋亡坏死率明显低于IgG1-CIK组;(4)CD137-CIK组细胞体外杀伤肺癌细胞株A549活性高于对照组(20:1,P>0.05;10:1和5:1时,P<0.05);(5)培养至14天,CD137mAb上调CD3+CD56+细胞内IL-2,IFN-γ,TNF-α表达,同时下调IL-4,TGF-β1,IL-10表达;(6)与IgG1-CIK组相比,CD137-CIK组中CD3+CD56+细胞表面NKG2D的表达较IgG1-CIK组明显增强,而NKG2A的表达则减弱;(7)结果显示,CD137-CIK组细胞可显著提高CD4+T细胞IFN-γ表达水平,同时降低IL-4的产生。肺癌患者:(1)第28天,CD137-CIK组和IgG1-CIK组中CD3+CD56+细胞比例都显著提高,分别达到(30.1±7.3)%和(21.7±5.7)%(p<0.01);(2)CD137-CIK组细胞体外杀伤肺癌细胞株A549活性明显高于IgG1-CIK组(10:1和5:1,P<0.01;20:1,P<0.05)。结论:CD137共刺激信号可有效的提高健康人和肺癌患者外周血中CIK细胞的扩增效率并增强CIK细胞体外非MHC限制性杀伤肿瘤细胞的能力;同时CD137信号通过提高CD3+CD56+细胞分泌Th1类细胞因子的能力,促使CIK细胞诱导CD4+Th0细胞向Th1方向分化,从而实现辅助激活体内细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫反应,发挥MHC限制性的抗肿瘤作用。上述研究结果为提高CIK细胞在实体瘤中的治疗效果提供更多的可行性依据。
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