【摘 要】
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油菜是世界上主要的油料作物之一,植物基因工程为油菜遗传改良提供了有效的途径。从整体上看,油菜再生和遗传转化的效率均不高,尤其是现有栽培品种,遗传转化所用材料仅局限在个别
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油菜是世界上主要的油料作物之一,植物基因工程为油菜遗传改良提供了有效的途径。从整体上看,油菜再生和遗传转化的效率均不高,尤其是现有栽培品种,遗传转化所用材料仅局限在个别品种上。本文以6个油菜品种为对象,通过培养基优化,建立了它们的高频再生体系,并对部分品种进行了遗传转化研究。以MS为基本培养基,研究了2,4-D、NAA和6-BA不同浓度及配比对油菜带柄子叶再生频率的影响。结果表明:2,4-D是影响再生途径的重要因素,添加 2,4-D能诱导形成愈伤组织,使外植体通过胚状体发生途径再生芽,不添加 2,4-D培养的外植体可直接再生;不同基因型材料的芽苗再生频率存在差异,甘蓝型油菜比埃塞俄比亚芥容易再生;6个基因型得油菜在MS+3.0 mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA培养基上均获得了高分化率,达到 45%~60[%]。在此基础上,利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napus L.)‘春 K101’带柄子叶,建立了根癌农杆菌介导的甘蓝型油菜‘春 K101’遗传转化再生的适宜培养条件为:预培养基和共培养培养基均为MS+0.5mg/L 2,4-D,诱导分化培养基为MS+3.0 mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+4.0mg/L AgNO3+500mg/L CB(分化率达到 76.1[%]),潮霉素筛选浓度为5.0mg/L,1/2MS+150mg/LCB诱导生根。最后,用PCR法进一步筛选得到阳性转化株。
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