论文部分内容阅读
目的:通过观察局灶性脑缺血大鼠脑组织PRX2m RNA、PRX6m RNA及PRX6蛋白的表达及应用依达拉奉干预的影响,探讨脑梗死后缺血组织自我保护机制以及依达拉奉保护脑组织的发生机制。方法:1将72只雄性SD实验大鼠随机分为三组:对照组、模型组、用药组。每组大鼠再根据时间点差别分三个亚组:1天、3天、7天组(每亚组8只)。其中模型组和用药组均采用鱼线栓塞法制备永久性大脑中动脉栓塞大鼠模型,对照组大鼠仅分离动脉而不结扎颈动脉。用药组于造模后半小时经腹腔注射给予依达拉奉药物,对照组和模型组在造模后半小时同法给予相同剂量生理盐水。此后每日给药一次,用药至处死之日。2于造模后2小时采用Zea Longa法对模型组和用药组脑梗死大鼠进行神经行为评分。评分在1-4分之间视为脑梗死模型造模成功,挑选分数在1-3分模型大鼠作为实验对象,排除神经功能缺损过重或者无损伤大鼠,并予以增补。3通过HE染色技术观察各组实验大鼠脑组织的病理学改变。4通过Western blot法检测各组实验大鼠脑组织PRX6的蛋白表达变化。5通过qRT-PCR法检测各组实验大鼠脑组织PRX2 m RNA、PRX6m RNA表达水平。6 TBA法测定各组实验大鼠脑组织中MDA的含量变化。结果:1 HE染色法观察实验大鼠大脑的病理学变化:对照组大鼠脑皮质细胞形态正常,结构完整,排列紧密,无大脑皮质神经细胞受损;模型组大鼠大脑皮质神经细胞受损严重,可见大脑皮质区片状坏死,部分神经元皱缩,细胞核固缩、深染,随时间延长病理学损伤程度逐渐加重;各时间点用药组神经细胞病理学损伤较模型组显著减轻。2 TBA法测定各组MDA含量变化:对照组中1d、3d、7d各时间点MDA含量分别是3.938±0.164、3.973±0.211、3.987±0.247;模型组中1d、3d、7d各时间点MDA含量分别是12.637±0.595、8.985±0.362、6.762±0.243;用药组中1d、3d、7d各时间点MDA含量分别是9.432±0.299、6.700±0.182、5.191±0.259。对照组组内各时间点MDA含量变化无统计学差异(P>0.05)。在模型组和用药组中各时间点MDA含量均显著多于对照组(P<0.05),用药组各时间点MDA含量显著低于模型组(P<0.05),但高于对照组(P<0.05);随造模时间延长模型组和用药组组内MDA含量逐渐降低(P<0.05)。3 qTR-PCR法测定各组大鼠脑细胞中PRX2、PRX6 m RNA相对表达情况:PRX2 m RNA相对表达水平结果如下:对照组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞中PRX2 m RNA表达水平分别为:0.990±0.018、0.987±0.026、1.018±0.028;模型组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞中PRX2 m RNA表达水平分别为:1.190±0.018、1.510±0.023、1.820±0.021;用药组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞中PRX2 m RNA表达水平分别为:1.765±0.016、2.093±0.026、2.438±0.030。RX6 m RNA相对表达水平结果如下:对照组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞PRX6 m RNA表达水平分别为:0.998±0.017、1.010±0.020、0.988±0.019;模型组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞中PRX6 m RNA表达水平为:1.091±0.015、1.268±0.032、1.397±0.016;用药组中1d、3d、7d各时间点的大鼠脑细胞中PRX6 m RNA表达水平为:1.301±0.038、1.404±0.024、1.509±0.031。随时间延长对照组组内PRX2 m RNA和PRX6 m RNA在脑细胞内的表达水平均不具有统计学差异(P>0.05),在模型组和用药组中PRX2 m RNA和PRX6 m RNA在细胞内的表达趋势相似,随造模时间延长模型组和用药组中PRX2 m RNA和PRX6 m RNA表达水平均逐渐增加(P<0.05);与对照组比较,各时间点模型组和用药组中PRX2 m RNA与PRX6 m RNA表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各时间点用药组中PRX2 m RNA和PRX6 m RNA表达水平均显著升高(P<0.05)。4 Western blot法测定实验大鼠脑细胞中PRX6表达情况:对照组中1d、3d、7d各时间点PRX6蛋白表达水平分别是:0.575±0.011、0.571±0.012、0.583±0.009;模型组中1d、3d、7d各时间点PRX6蛋白表达水平分别是:0.644±0.009、0.858±0.029、1.085±0.034;用药组中1d、3d、7d各时间点PRX6蛋白表达水平分别是:0.848±0.032、1.189±0.047、1.386±0.035。对照组各时间点PRX6蛋白表达水平不具有统计学差异(P>0.05);随造模时间延长模型组和用药组组内PRX6蛋白含量逐渐增加(P<0.05);与对照组比较,各时间点模型组和用药组中PRX6蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,各时间点用药组中PRX6蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:1大鼠脑梗死后启动了氧化应激损伤,且PRX2、PRX6蛋白可能参与大鼠脑梗死后抗氧化应激自我保护机制。2依达拉奉对大鼠脑梗死具有保护性作用,机制可能与通过上调缺血组织PRX2、PRX6蛋白表达,增强机体抗氧化应激作用有关。