【摘 要】
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目的:建立天麻基因组DNA的提取方法、天麻RAPD分析的优化条件,对贵州产天麻进行RAPD分析.方法:(1)用CTAB法结合酚/氯仿法加以改良提取天麻基因组DNA(2)根据文献参考条件,改变
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目的:建立天麻基因组DNA的提取方法、天麻RAPD分析的优化条件,对贵州产天麻进行RAPD分析.方法:(1)用CTAB法结合酚/氯仿法加以改良提取天麻基因组DNA(2)根据文献参考条件,改变Mg<2+>、dNTPs、DNA模板、TaqDNA聚合酶浓度建立天麻RAPD分析的优化条件;(3)根据优化的天麻RAPD分析条件用个随机引物对天麻进行RAPD分析.结果:(1)提取的天麻基因组DNA纯度高(A<,260>/A<,280>>1.8),耗时短(2~3h),分子大小为50kb,使用于RAPD分析.(2)当反应液中含模板DNA量为100ng,3.0 mmol/L Mg<2+>,0.2mmol/L dNTPs,1U TaqDNA聚合酶,0.2μmol/L引物时,RAPD分析效果佳.(3)扩增条带可作为鉴定野生型天麻DNA和人工种植天麻DNA以S60为引物的扩增条带有差异;天麻的地源距离较远时,相似系数较小,亲缘关系较远.结论:本实验所用的改进法提取的天麻基因组DNA质量高,适合RAPD分析,耗时短、成本低;优化后的RAPD条件扩增的DNA条带清楚、稳定性高,重复性好;天麻亲缘关系的远近与地源距离有关,S60扩增条带可作为鉴别野生型天麻和人工种植天麻的分子标记.
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