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研究目的滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cell,Tfh)为重要的免疫调节细胞,趋化因子受体7型(Chemokine receptor type 7,CCR7)是趋化因子受体超家族中的重要成员,可介导细胞迁移侵袭,但它们在复发性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)的作用机制并不明确。本课题研究Tfh细胞和CCR7在复发性流产中的表达及具体作用机制。研究方法收集RSA和因自愿要求终止妊娠行人工流产术的正常早孕妇女(孕8-10周)的对照组患者外周血和蜕膜,利用流式细胞术检测两组间外周血和蜕膜组织中Tfh细胞亚型表达差异,并进行相关性分析。收集RSA和对照组患者绒毛组织,利用定量PCR和Western Blot方法检测两组绒毛组织CCR7表达差异;在JEG-3和JAR细胞系中,通过划痕实验和Transwell实验检测CCR7对滋养细胞迁移和侵袭能力的作用,采用干扰RNA、添加CCR7配体激动剂等实验,通过定量PCR和Western Blot等方法研究CCR7对滋养细胞迁移侵袭能力的具体调控机制;最后在RSA和对照组患者绒毛组织中通过q RT-PCR和Western Blot等方法验证下游分子在m RNA水平和蛋白水平的表达情况。研究结果1.与正常对照组患者比,RSA患者蜕膜组织中CD4+CXCR5+memory Tfh细胞、CD4+CXCR5+PD-1+memory Tfh细胞、CD4+CXCR3-CCR6-memory Tfh细胞和CD4+CXCR5+PD1+CCR7-memory Tfh细胞和CD4+CXCR5+PD1+ICOS+memory Tfh细胞表达显著升高;2.RSA患者按照抗体表达分为阳性和阴性组,与阴性RSA组比,阳性RSA组蜕膜组织中CD4+CXCR5+PD1+ICOS+memory Tfh细胞表达显著升高,且与B细胞表达有密切相关性。3.与正常对照组患者比,RSA患者绒毛组织中CCR7 m RNA及蛋白水平均显著下降;4.在JEG-3和JAR细胞中,敲低CCR7后,通过下调AKT通路降低GATA2和MMP2的表达,抑制细胞的迁移侵袭能力;相反,CCL19通过激活AKT通路上调GATA2和MMP2的表达,增强细胞的迁移侵袭能力;5.与正常对照组患者比,RSA患者绒毛组织中p-AKT、GATA2和MMP2表达水平均显著下降。结论Tfh细胞亚型在蜕膜组织中表达异常,且与B细胞的异常激活密切相关,这可能是导致母胎免疫失衡从而引起复发性流产的因素之一;CCR7通过AKT通路调节GATA2的表达,从而影响MMP2的表达,最终使滋养细胞的迁移侵袭能力发生改变,这可能是导致胚胎着床失败引发复发性流产的因素之一。CCR7及其下游分子在RSA患者绒毛组织中的表达下调,同时CCL19可以逆转CCR7下调引起的流产,为复发性流产的发病机制提供了新的理论基础,为流产预防治疗提供了新的靶点。