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肿瘤基因治疗是通过功能性治疗基因的导入,利用基因的产物来对付癌变细胞和组织,达到治疗目的。建立一个安全有效能特异性靶向肿瘤部位的基因治疗体系是肿瘤基因治疗研究的热点。组织因子(tissue factor,TF)在肿瘤血管内皮细胞高表达,也在一些类型的恶性肿瘤细胞上有表达,而在正常血管内皮细胞不表达,因此可以作为特异性治疗肿瘤的靶点。与TF能特异性结合的凝血酶因子FⅦ,由一条20 kD轻链和一条30 kD的重链通过二硫键连接而成,轻链负责靶向和TF结合,重链负责凝血功能,小鼠的FⅦ轻链(mouse light chain of FⅦ, mLFⅦ)可以紧密的与人和小鼠的TF结合,而人的FⅦ轻链(human light chain of FⅦ,hLFⅦ只能和人的TF结合与小鼠的TF结合不紧密。因此,可以将小鼠FⅦ轻链部分作为一个具有靶向功能的原件用于靶向肿瘤治疗。IgG在体内分布广泛,是血液和组织液中含量最高的免疫球蛋白,该蛋白通过N端可变区Fab段识别和结合抗原,C端恒定区Fc段结合表达Fc受体的细胞(FcR细胞),引发抗原(如肿瘤细胞、病毒感染细胞或细菌)被FcR细胞清除。由于可变区与抗原的结合是特异性的、而Fc段所引发的免疫效应是非特异性的,因此,将IgG的抗原识别区换成特异性识别肿瘤细胞的分子而保留Fc段,所构建的新蛋白质就可以引发机体的免疫系统来特异性杀伤肿瘤细胞。本文以TF为靶点,以mLFⅦ为靶向分子,以IgG1抗体Fc段为效应分子,构建了“靶向+效应”的融合基因治疗体系。第一、为了研究mLFⅦ的靶向性,构建了能表达mLFⅦ-E2的红色荧光融合蛋白和能表达mLFⅦ-YFP勺黄色荧光融合蛋白示踪质粒：pSCIgκ-mLFⅦ-E2, pSCIgK-mLFⅦ-YFP。第二、构建了能表达mLFⅦ和IgG1抗体Fc段的融合蛋白治疗质粒：pSCIgκ-mLFⅦ-Fc。第三、为了清晰直观的观测基因治疗效果,构建了发绿色荧光的人肝癌SK-Hep-1-G裸鼠皮下肿瘤模型。第四、为了检测TF的含量对肿瘤治疗效果是否有影响,构建了TF高表达的人肺癌NCI-H292裸鼠皮下肿瘤模型和TF低表达的人肺癌A549裸鼠皮下肿瘤模型。L64/电击结合的基因传递方法是一种安全有效的肌肉基因传递方法,所以我们利用L64/电击结合的基因传递方法将构建好的质粒注射至裸鼠模型的胫骨前肌部位并传递进入肌肉细胞,利用肌肉细胞表达的目的蛋白在信号肽的作用下分泌至细胞外,经过血液循环,在mLFⅦ的引导下靶向结合到肿瘤新生血管内皮细胞或肿瘤细胞表面的组织因子TF上,效应分子Fc与表达Fc受体的免疫细胞结合并活化补体功能,导致肿瘤新生血管的破坏和肿瘤组织的清除。实验研究表明,该基因治疗体系能明显治疗含有TF因子的肿瘤尤其是高表达TF的肿瘤的生长.