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肺部感染是我国面临的重大健康问题之一,给社会造成了巨大的经济负担。与此同时,伴随着各种耐药菌的不断出现,使得以抗生素治疗为主导的方案面临着越来越大的挑战,因此研究机体自身的内在抗感染机制,将有可能为我们治疗肺部感染提供新的思路。巨噬细胞是一种极具异质性的免疫细胞,具有表型可塑性和功能多样性的特征。在LPS、IFN-γ等的刺激下,巨噬细胞可转化为经典激活型巨噬细胞(M1),其特征表现为产生多种促炎细胞因子,如TNF-α、IL-6、IFN-γ、iNOS和NO,起到杀灭病菌、抵抗病原微生物入侵以及抑制肿瘤生成的作用。在IL-4、IL-13等的刺激下巨噬细胞可转化为选择性激活型巨噬细胞(M2),其特征是分泌抗炎细胞因子,如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β等,发挥抑制炎症的作用,同时可在组织修复与重建、脂类代谢、过敏反应和肿瘤的形成过程中发挥作用。髓样相关蛋白8(MRP8)和髓样相关蛋白14(MRP14)作为损伤相关分子模式(danger-associated molecular patterns,DAMPs)的成员,两者常以复合物的形式存在,当中性粒细胞和巨噬细胞激活或坏死的时候,MRP8/14能够被大量释放到细胞外,参与体内炎症反应及免疫反应的调节,进而影响炎症以及感染性疾病的病理生理过程。目的:探讨MRP8/14能否促进巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化,进而增强其杀菌能力;并且从信号通路的角度讨论MRP8/14是否通过激活NF-κB调节巨噬细胞向M1型转化,使用敲基因小鼠来检测RAGE和TLR4受体在MRP8/14调节巨噬细胞表型极化中的作用,从而进一步阐明MRP8/14促进巨噬细胞向M1型转化以及增强其杀菌能力的机制。方法:1、MRP8/14刺激后巨噬细胞的表型极化情况采用流式细胞术、液相芯片技术、实时荧光定量PCR技术检测巨噬细胞极化的相关代表因子的表达。2、表型极化相关信号通路的鉴定。2.1 Western blot检测MRP8/14刺激后JNK和STAT1的磷酸化情况以及NF-κB的活化情况。2.2采用通路的特异性抑制剂预处理巨噬细胞后,再用MRP8/14刺激巨噬细胞,检测巨噬细胞极化相关指标的变化情况,验证MRP8/14调节巨噬细胞表型极化的信号通路情况。3、使用敲基因小鼠检测RAGE和TLR4受体在MRP8/14调节巨噬细胞表型极化中的作用。结果:1、MRP8/14促进巨噬细胞向M1型转化流式细胞术、液相芯片技术以及qPCR检测结果显示:MRP8/14可以显著上调M1型巨噬细胞各代表因子的表达(p<0.01)。2、MRP8/14通过NF-κB信号转导通路介导巨噬细胞向M1型转化2.1 Westtern blot 结果显示:MRP8/14 可激活 Raw264.7 细胞的 NF-κB 和 JNK通路,而对STAT1通路没有影响。22.2采用NF-κB和JNK的特异性抑制剂预处理Raw264.7细胞,再给于MRP8/14刺激。实验结果显示:与MRP8/14组相比,Bay11-7082+MRP8/14组能显著降低M1的各项检测指标的表达水平(p<0.05),实验结果表明,NF-κB参与了 MRP8/14促进巨噬细胞向M1型转化。3、TLR4受体参与了 MRP8/14对巨噬细胞表型极化的调节。4、MRP8/14可以增强巨噬细胞的杀菌能力。结论:MRP8/14通过TLR-4-NF-κB通路促进巨噬细胞向M1型极化从而增强其杀菌能力。