论文部分内容阅读
目的制备BALB/c小鼠社会隔离应激刺激模型,探讨社会隔离应激刺激对BALB/c小鼠行为的影响;给予依赖双链RNA的腺苷酸脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)抑制剂或诱导剂干预,进一步探讨ADAR1在社会隔离应激刺激引起的BALB/c小鼠异常行为中的作用机制。方法选取出生21天的健康雄性BALB/c小鼠,单笼饲养4周,建立社会隔离应激刺激模型,相同周龄健康雄性BALB/c小鼠群居饲养作为对照组。按照随机分组原则,分为隔离组、群居对照组、药物干预组(ADAR1抑制剂隔离组和ADAR1诱导剂隔离组)和药物干预对照组(ADAR1抑制剂群居组和ADAR1诱导剂群居组)。药物干预组和药物干预对照组给予ADAR1抑制剂(EHNA)或ADAR1诱导剂(IFN-γ)进行干预,隔离组和群居对照组则给予相应等量生理盐水。采用旷场实验、新物体识别实验、入侵者实验、悬尾实验和强迫游泳实验分别检测小鼠的自主行为、探索行为、认知功能、攻击性行为和绝望程度的改变;进一步用免疫组化和western blot检测小鼠脑内ADAR1和5-羟色胺2C受体(5-HT2C receptor,5-HT2CR)的免疫反应活性和蛋白表达的改变。结果行为学结果显示:1.在旷场实验中,与群居对照组相比,隔离组小鼠的运动路程和在中央区域的时间均明显减少。与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠的运动路程和在中央区域的时间均明显增多;2.在新物体识别实验中,与群居对照组相比,隔离组小鼠的辨别指数明显降低;与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠的辨别指数明显增加,而ADAR1抑制剂隔离组与隔离组相比其辨别指数明显降低;3.在入侵者实验中,与群居对照组相比,隔离组小鼠的攻击潜伏期明显缩短,而攻击次数明显增多,攻击要害部位和非要害部位的时间也明显增多。与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠的攻击潜伏期明显延长,而攻击次数明显减少,攻击要害部位和非要害部位的时间也明显减少;与隔离组相比,ADAR1抑制剂隔离组小鼠的攻击潜伏期明显缩短,攻击非要害部位的时间明显增多;4.在悬尾实验和强迫游泳实验中,与群居组对照相比,隔离组小鼠的不动时间明显增加;与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠的不动时间明显减少;免疫组化结果显示:与群居对照组相比,隔离组小鼠的前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1表达阳性的神经元光密度值明显降低;与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠的前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1表达阳性的神经元光密度值明显增高,而ADAR1抑制剂隔离组无明显差异;Western blot结果显示:与群居对照组相比,隔离组小鼠的前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1和5-HT2CR的蛋白表达均明显降低;与隔离组相比,ADAR1诱导剂隔离组小鼠前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1和5-HT2CR的蛋白表达均明显增加。结论1.4周社会隔离应激刺激后,BALB/c小鼠出现抑郁样行为,绝望程度明显增加,非空间认知功能显著减弱,攻击性行为明显增强;2.4周社会隔离应激刺激后,BALB/c小鼠前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1和5-HT2CR的免疫反应活性和蛋白表达均明显降低;3.ADAR1抑制剂增强社会隔离应激刺激BALB/c小鼠出现的非空间认知功能障碍和攻击性行为;4.ADAR1诱导剂减轻社会隔离应激刺激BALB/c小鼠的抑郁样行为、增强的绝望程度、非空间认知功能障碍以及增强的攻击性行为;5.ADAR1诱导剂逆转社会隔离应激刺激BALB/c小鼠前额叶皮层、海马区以及杏仁核区ADAR1和5-HT2CR的低表达。