真菌杀虫剂作为化学农药的替代品,不仅使害虫不易产生抗药性,而且对环境更加友好,发展潜力巨大。然而,杀虫周期长、生产成本高以及防治效果不稳定使其大规模应用受限。绿僵菌是世界范围内研究得最多的真菌杀虫剂之一,主要活性单位是分生孢子。孢子不仅在真菌的生长繁殖和发育过程中发挥重要作用,同时也是感染宿主的主要侵染单元。研究绿僵菌的产孢、抗逆、营养利用及致病机制,可为真菌杀虫剂的开发和田间应用提供理论依据。前期研究中,我们发现类钙调磷酸酶（calcineurin-like phosphatase,CLP）是在碳源调控微循环产孢方式中上调表达的基因。有研究表明CLP与真菌孢子的生长发育和葡萄糖的利用相关。为阐明CLP在蝗绿僵菌（Metarhizium acridum）生长、产孢、抗逆及毒力中的作用,本研究利用基因敲除和回复技术,获得了MaCLP的敲除菌株和回复菌株。通过对敲除菌株生长、逆境耐受性、营养利用及毒力进行分析,明确MaCLP在蝗绿僵菌中的功能。MaCLP基因登录号为MAC＿05025,生物信息学分析表明该基因全长为2326 bp,具有6个内含子,其c DNA的长度为1938bp,共编码645个氨基酸。通过同源序列分析比对发现,MaCLP具有保守的特征基序。主要研究结果如下:MaCLP缺失后影响蝗绿僵菌的生长以及产孢。在营养丰富的1/4 SDAY培养基上,ΔMaCLP菌落直径大于野生型（WT）;分生孢子萌发显著延迟;产孢延迟,生长前期产孢量低于野生型,后期高于野生型。在微循环产孢培养基SYA上,ΔMaCLP产孢方式发生了转换,由微循环产孢转变为正常产孢,菌落直径显著增大。MaCLP缺失后影响蝗绿僵菌的逆境耐受性。与WT相比,ΔMaCLP湿热耐受性降低。湿热处理后,WT中MaCLP基因在第6 h时表达量最高。此时热休克蛋白基因Ssb1、泛素化蛋白基因Ubil的表达量降低。MaCLP缺失不影响绿僵菌紫外耐受性,但对高盐、高渗以及金属Mn2+的耐受性增强。MaCLP负调控蝗绿僵菌对营养的利用。ΔMaCLP在不同碳源和氮源培养基上的菌落生长速率显著增加,产孢量增加。对蝗虫进行生测显示,MaCLP缺失后不影响蝗绿僵菌的毒力。酵母双杂交显示,MaCLP与氮源代谢相关蛋白MaGS1、MaAmd S,糖酵解途径的Ma PFK,热休克蛋白MaWos2间存在互作。综上所述,MaCLP可能通过影响碳氮代谢的相关基因来调控蝗绿僵菌的生长、产孢、营养利用、逆境耐受性以及毒力的能力。