肾小管上皮细胞构成的肾小管是肾脏的重要功能单位,肾系疾病的病灶部位也主要发生在肾小管。因此,利用体外构建的肾小管上皮细胞模型,不仅可在细胞分子水平研究肾系相关疾病的病理机制,还可进行相关药物的筛选及作用机制研究。本研究目的是通过外源物诱导建立体外肾毒性细胞模型,研究中药提取物对外源物致肾小管上皮细胞毒性的保护作用。第一部分建立了兔原代肾小管上皮细胞模型。采用机械研磨过筛联合酶消化法分离培养了兔原代肾小管上皮细胞,经形态学鉴定,细胞呈鹅卵石铺路状的上皮样细胞形态,碱性磷酸酶染色和免疫组化染色的鉴定结果均为阳性,成功在体外构建兔原代肾小管上皮细胞模型。第二部分建立了三种外源物诱导兔原代肾小管上皮细胞的体外肾毒性细胞模型。采用庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ对兔原代肾小管上皮细胞进行诱导,以形态学改变、细胞增殖抑制率及细胞LDH释放量为模型评价指标,判断三种外源物的肾毒性作用。结果表明:庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ均使细胞的形态发生明显改变,对细胞的增殖均有抑制作用,均使细胞LDH释放量增高,并且三种作用结果均呈浓度依赖性。综上所述,庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ均可在体外诱导兔原代肾小管上皮细胞构建体外肾毒性细胞模型。第三部分研究了16种中药提取物对三种外源物致肾小管上皮细胞毒性的保护作用。采用中药水煎物和醇提物的低、中、高剂量(3 mg/L、30 mg/L、150 mg/L)对肾小管上皮细胞进行预保护后,分别采用庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ对细胞进行损伤,通过细胞增殖抑制率及细胞LDH释放量的改变判断中药提取物的保护作用,结果如下:本研究中16种中药提取物对兔原代肾小管上皮细胞预保护后庆大霉素的细胞毒性作用的结果表明,能够显著减轻庆大霉素的细胞增殖抑制作用的中药提取物高、中浓度的有1种提取物;高浓度1种提取物。能够显著降低庆大霉素作用后细胞LDH释放量的中药提取物分别有高、中、低浓度4种提取物;高、中浓度4种提取物;中、低浓度1种提取物;高浓度4种提取物。本研究中16种中药提取物对兔原代肾小管上皮细胞预保护后顺铂的细胞毒性作用的结果表明,能够显著减轻顺铂的细胞增殖抑制作用的中药提取物分别有高、中、低浓度2种提取物;高、中浓度6种提取物;高浓度7种提取物。能够显著降低顺铂作用后细胞LDH释放量的中药提取物分别有高、中、低浓度7种提取物;高、中浓度2种提取物;中、低浓度3种提取物;高浓度4种提取物。本研究中16种中药提取物对兔原代肾小管上皮细胞预保护后马兜铃酸Ⅰ的细胞毒性作用的结果表明,能够显著减轻马兜铃酸Ⅰ的细胞增殖抑制作用的中药提取物分别有高、中、低浓度2种提取物;高、中浓度3种提取物;中、低浓度4种提取物;高浓度10种提取物。能够显著降低马兜铃酸Ⅰ作用后细胞LDH释放量的中药提取物分别有高、中、低浓度1种提取物;高、中浓度1种提取物;中、低浓度1种提取物;高浓度6种提取物。综上所述,本研究成功在体外构建了兔原代肾小管上皮细胞模型,并在此基础上分别通过庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ诱导获得体外肾毒性细胞模型。研究了16种中药提取物对庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ致肾小管上皮细胞毒性的保护作用,筛选出对能够减轻外源物的细胞增殖抑制作用和能够降低外源物作用后的细胞LDH释放量的中药。