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口腔癌是位列第六的全身系统常见癌症,其中90%以上是鳞癌。早期诊断是提高口腔癌患者牛存率和生存质量的关键因素,但当患者出现如疼痛、出血、溃疡、肿块、影响语言或吞咽等症状而就诊时,往往已经发生肿瘤的浸润和转移。因此,如何筛选高危人群并对其进行相应治疗,成为实现早期诊断的目标。
DNA复制是细胞周期、发育以及癌症形成当中的关键事件。真核牛物中,为保证遗传物质精确传递到子代,一个细胞周期中DNA只能复制一次。DNA获得复制的能力足通过各种相关调控蛋白与DNA复制起始点顺序性结合而实现的,丰要包括ORCs、Cdc6、Cdt1和Mcms等。细胞分裂周期蛋白(Cell division cycle protein6,Cdc6)是DNA复制的首要因子,是形成复制前复合体(Pre—replication complex,Pre-RC)的主要成分,是确保细胞在细胞周期中只复制一次的重要因子。而微小染色体维持蛋白7(Minichromosome maintenance protein7,Mcm7)也是DNA复制和延伸的重要因子。肿瘤细胞是典型的恶性增殖细胞,在无序增殖的同时伴随着DNA复制,因而在肿瘤细胞中存在高表达的Cdc6与Mcm7蛋白。这一理论依据为口腔癌的早期诊断提供了新的思路。我们试图运用免疫组织化学和RT-PCR的方法,探讨口腔鳞癌和癌前病变中复制起始蛋白Mcm7和Cdc6的表达情况,初步揭示细胞周期复制起始蛋白在口腔鳞癌和癌前病变中的作用。
目的:
探讨微小染色体维持蛋白7(Minichromosome maintenance protein7,Mcm7)和细胞分裂周期蛋白(Cen division cycle protein6,Cdc6)在口腔鳞癌和癌前病变中的表达状况及临床意义。
方法:
1.采用免疫组织化学方法检测34例癌前病变(白斑)、54例口腔鳞癌以及10例口腔正常粘膜共98例石蜡标本中Mcm7和Cdc6蛋白的表达与定位,并分析其表达量与病理学分级、临床分期及与淋巴结转移的关系。
2.采用RT—PCR方法检测手术中切除的15例癌前病变(自斑)、22例口腔鳞癌及10例口腔正常粘膜共47例冰冻组织标本中Mcm7和Cdc6 mRNA表达量的差异。
结果:
1.免疫组化结果显示:Mcm7蛋白在正常口腔粘膜、癌前病变以及鳞癌组织中均有阳性表达,其阳性标记指数分别为3.6%,22.3%,45.9%。各组之间阳性标记指数均有明显差异(P<0.01)。鳞癌组Mcm7蛋白表达阳性标记指数显著高于癌前病变组(P<0.01)。Cdc6蛋白在以上标本中的阳性表达总体较Mcm7低,在正常口腔粘膜中没有表达,从轻度不典型增生、中至重度不典型增牛到鳞癌组其阳性标记指数分别为1.5%,24.7%,31.2%。各组之间阳性标记指数均有明显差异(P<0.01)。两者在有淋巴结转移组其阳性标记指数明显高于无转移组(P<0.01)。
2.RT-PCR结果显示:Mcm7mRNA无论在正常粘膜,还是在癌前病变和鳞癌中均有阳性表达,其相对表达量分别为1.932,2.451,3.123。各组之间相对表达量有明显差异(P<0.01)。而Cdc6mRNA在正常粘膜中鲜有表达,癌前病变与鳞癌中均有阳性表达,其相对表达量分别为1.798,2.448,2.903。各组之间相对表达量亦有明显差异(P<0.01)。
结论:
1.复制起始蛋白Mcm7、Cdc6在正常口腔粘膜中低表达或者不表达,在癌前病变和口腔鳞癌组织中表达显著上调且表达量逐渐增强。
2.Mcm7和Cdc6在有淋巴结转移组其阳性标记指数明显高于无转移组。
3.Mcm7和Cdc6的高表达与口腔鳞癌发生及淋巴结转移有相关性。检测口腔鳞癌组织中Mcm7和Cdc6的表达可望成为其早期诊断与判断预后的分子指标之一。