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本次研究的主要目的是检测获能和冷冻处理对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。以手握法采集的猪精液为试验材料,试验主要分4步进行:Ⅰ检测肝素浓度(0、10、50、100μg/mL)和获能处理时间(0、30、60、90、120min)对猪精子获能效率的影响;Ⅱ检测肝素浓度对精子体外存活时间及精子质量参数的影响;Ⅲ将获能处理不同时间的精子进行间接免疫荧光法处理,荧光显微镜下显示精子蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;Ⅳ将精子进行冷冻处理,分别处理不同时间,解冻后进行间接免疫荧光处理,荧光显微镜下显示精子酪氨酸磷酸化蛋白水平。试验结果如下:1、未添加肝素组(对照组)也有一定的获能率,但是低于其他肝素处理组(试验组)。获能率随着获能时间和肝素浓度的增加而逐渐升高。浓度为50μg/mL和100μg/mL的肝素处理60min后出现平台期,显著高于其他组(P＜0.05)。2、肝素浓度的增加引起精子体外存活时间的减少。100μg/mL浓度试验组精子存活时间明显下降,与其他试验组差异显著(P＜0.05)。随着获能时间的增加,精子活率逐渐降低。获能处理对精子质膜完整性的影响很大,所有试验组均与对照组差异显著(P＜0.05)。3、获能处理对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化水平变化影响明显;未经处理的精子仅在精子颈部可见略淡的酪氨酸磷酸化位点。而经过处理的精子蛋白酪氨酸磷酸化程度加深,荧光显色明显,在精子顶体部和尾部均可见明显的酪氨酸磷酸化位点。随着获能处理时间的延长,精子顶体部与尾部荧光显色越来越明显,证明获能处理能够引起精子内部酪氨酸磷酸化蛋白发生磷酸化。获能处理60min和90min时,精子蛋白酪氨酸磷酸化位点集中在顶体部和尾部。4、冷冻处理的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平变化不明显;冷冻处理后的精子蛋白酪氨酸磷酸化位点仍然主要集中在精子颈部,这与未经处理的精子大体一致,不同的是冷冻处理组磷酸化程度加深。而且随着时间的延长,精子尾部出现微弱的磷酸化位点。