金属离子对马氏珠母贝珍珠层颜色和金属硫蛋白基因表达的影响

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马氏珠母贝(Pinctada martensii)主要分布于日本、印度、印尼和我国南部沿海,是生产中小规格海水珍珠的主要贝种,在我国广东、广西和海南沿海有较大规模的人工养殖。本文通过在饵料和养殖水体中添加特定的金属离子,贝体富集一定时间后,测定珍珠层中富集离子和颜色的差异,分析不同金属离子富集后的分布及对珍珠层颜色的影响;同时应用qRT-PCR技术分析富集金属离子对外套膜中金属硫蛋白表达的影响。结果表明:1.不同壳色贝壳中金属离子含量有差异。从本实验室的马氏珠母贝黑色,红色,白色和金黄色选育群体中挑选壳色鲜明的个体,将贝壳洗净烘干后粉碎制样,ICP-MS分析。四种壳色测试14种元素,Mn、Zn、Cu、Cd四种离子在不同壳色间含量有显著差异(P <0.05):黄色贝壳Mn>白色贝壳;黑色贝壳Cu>白色贝壳,Cd>其它三种颜色贝壳;红色贝壳Zn>其他三种颜色贝壳。2. Cu、Zn、Cd、Mn四种金属离子对马氏珠母贝速长系的急性毒性实验显示:96h半致死浓度依次为0.16mg/L、4.42mg/L、5.3mg/L、244mg/L,计算获得的安全浓度分别为0.016mg/L、0.442mg/L、0.53mg/L、24.4mg/L,据此推断四种金属离子毒性强度大小依次为Cu2+>Zn2+>Cd2+>Mn2+。3.小球藻对4种金属离子的富集实验显示,Cu2+、Zn2+、Cd2+、Mn2+四种离子达到富集平衡时吸附率分别为:80%、85%、55%、79%,吸附系数分别是1391、1000、245、686。4.采用富集重金属的小球藻投喂(记为实验组I-Cu、I-Zn、I-Mn和I-Cd)和在养殖水体中添加金属离子(记为实验组II-Cu、II-Zn、II-Mn和II-Cd)两种方式进行马氏珠母贝富集实验。测定珍珠层离子含量发现:实验组金属离子含量比对照组有所增加,但无显著性差异(P>0.05)。用色差仪测量贝壳外缘珍珠层颜色参数,结果表明:颜色参数L均为55左右,a值均在红色范围,b值均在蓝色范围。除I-Mn-Black,II-Cu-Black和II-Cu-I-Mn以外,其他实验组间色差值均在1.5以上,属于明显色差。5.从本课题组转录组数据中筛选得到编码金属硫蛋白的unigene,其长度为265bp,编码85个氨基酸。在安全浓度下,Cu、Zn、Mn和Cd四种离子诱导外套膜金属硫蛋白的表达情况显示:Cu离子诱导的表达量呈递增趋势,10天时达到最大值,之后逐渐降低,到第20天时,表达基本恢复至原有水平;锌离子诱导的表达变化趋势与铜离子的基本一致,表达恢复相对缓慢;锰离子诱导的表达与铜锌离子有所不同,在第15天才发生显著上调,到第20天时,其表达开始降低;Cd离子诱导的表达未产生显著变化。
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