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高尿酸血症(Hyperuricemia)是因尿酸排泄障碍所引起的血尿酸增高的疾病。人体大约有70%尿酸经肾脏随尿排出,其排泄主要是依赖肾上皮细胞转运体,现已有一定研究。30%尿酸可经肠道排出却并未受到重视。肠上同样分布有一些参与肾脏尿酸排泄的转运体,但其在尿酸排泄中的作用尚不清楚。本课题拟考察大黄酸对肠转运体以及肠道尿酸排泄可能的影响,初步揭示其干预尿酸代谢的分子机制。现将论文的主要研究工作概括如下:一、果糖对Caco-2细胞尿酸相关转运体基因表达的影响本实验用不同浓度果糖溶液刺激Caco-2细胞,应用real time-PCR检测果糖对肠上皮细胞转运体mRNA表达的影响。结果发现,果糖浓度在60μM时,可刺激转运体MCT9,ABCG2,GLUT9 mRNA的表达,抑制转运体MRP2 mRNA的表达,提示高果糖饮食致高尿酸血症的原因是其刺激重吸收转运体GLUT9mRNA的表达,增加尿酸的重吸收;抑制外排转运体MRP2 mRNA的表达,减少尿酸的排泄。二、大黄酸对果糖作用下的肠上皮细胞尿酸相关转运体基因表达的影响。采用MTT法确定大黄酸对Caco-2细胞的最大浓度后,刺激果糖作用下的Caco-2细胞,应用real time-PCR检测大黄酸对果糖作用下的肠上皮细胞尿酸相关转运体基因表达的影响。实验结果发现,大黄酸的浓度在0~5mg·L-1时,各时间点细胞活性均不会降低。在果糖作用下,大黄酸浓度在2.5 mg·L-1和5 mg·L-1时,均能显著上调Caco-2细胞外排转运体MRP2m RNA的表达,下调重吸收转运体GLUT9 m RNA的表达,即大黄酸可通过增加肠道尿酸的排泄,减少肠道尿酸重吸收来降尿酸。三、尿酸在Caco-2细胞模型的透过研究。本实验借助Caco-2细胞模型,研究不同吸收转运调节剂对尿酸透过影响。结果显示,GLUT9、MRP2、ABCG2蛋白对尿酸在小肠透过过程中起调控作用,并且MRP2蛋白和ABCG2蛋白参与尿酸由血液向肠腔的排泄,GLUT9蛋白参与尿酸由肠腔向血液的重吸收。四、大黄酸对急性肾功能不全高尿酸动物模型的尿酸排泄情况研究及作用机制的初步探讨。手术摘除右肾、腹腔注射氧嗪酸钾盐制造急性肾功能不全的高尿酸动物模型,观察大黄酸对该模型大鼠肠道尿酸排泄情况的影响。应用real time-PCR检测各肠段转运体m RNA的表达。结果发现,大黄酸在肾损伤情况下可通过下调GLUT9 m RNA的表达,降低尿酸的重吸收从而降低血清尿酸含量。由此我们得出结论:GLUT9、MRP2、ABCG2在肠道尿酸排泄中也发挥着作用,大黄酸主要是通过下调GLUT9的表达来降尿酸。