论文部分内容阅读
硒是人体必不可少的微量元素之一。硒摄入的极度缺乏往往与某些疾病密切相关,如Keshan病、Kashin-Beck病以及地方性克汀病。多个流行病学以及实验室研究资料显示血清硒含量与肿瘤的发生呈负相关,且硒的补充能够降低包括食管癌在内的多种肿瘤的发生风险。在对硒的研究中,研究者们发现高剂量的含硒化合物能够特异性地杀伤肿瘤细胞而不会对正常细胞产生显著毒性。这使得含硒化合物有望成为治疗肿瘤的药物。目前含硒化合物的抗肿瘤研究还处于临床前阶段。甲基硒酸(MSA)是一种稳定的合成的单甲基含硒化合物,经细胞吸收后能够直接被还原为甲基硒醇,从而进一步发挥细胞毒性作用。目前,MSA的肿瘤杀伤效应已经在前列腺癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌和透明细胞肾癌中得到证实,而在食管癌方面的研究还很少。我们实验室一直从事硒在食管癌方面的研究,已经证实MSA能够抑制食管鳞癌细胞的生长,本文将在食管鳞癌细胞系以及小鼠模型中进一步探究MSA抑制食管鳞癌细胞生长的作用机制。我们发现在食管鳞癌细胞系KYSE150和KYSE510中MSA能够显著下调表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白水平,但不影响EGFR的mRNA水平。通过microRNA芯片的检测我们发现MSA能够上调miR-146a,而已有研究显示EGFR正是miR-146a的直接靶基因之一。通过miR-146a的互补序列antagomir-146a抑制miR-146a能够有效回复MSA对EGFR蛋白的下调作用。我们还利用4-硝基喹啉-氧化物(4NQO)诱导的小鼠食管癌模型探究MSA在体内对食管癌的抑制作用。结果显示MSA处理组的小鼠的肿瘤数量和肿瘤负荷以及EGFR的表达均显著低于对照组。此外,我们还发现MSA能够下调食管鳞癌细胞系IL-6的外泌以及4NQO诱导的小鼠血清中IL-6的含量。为进一步探究IL-6与MSA抑瘤作用之间的关系,我们用IL-6基因敲除小鼠进行4NQO诱导食管癌模型的构建,比较MSA的抑瘤作用,结果显示虽然IL-6的缺失不会影响4NQO诱导的食管癌的发生,但IL-6的缺失能够拮抗MSA的抑瘤效果。尽管已有很多硒在营养层面对免疫系统的调节作用的相关研究,但对于作为抗癌药物的含硒化合物对肿瘤微环境的调控研究还很少。在此,我们通过免疫组化对4NQO诱导的小鼠食管癌模型中的肿瘤微环境进行检测,发现MSA能够减弱巨噬细胞和中性粒细胞的浸润同时增加Granzyme B的表达。而在IL-6缺失的小鼠中MSA对肿瘤微环境的上述调节作用明显减弱。综上所述,本研究表明MSA可通过上调miR-146a抑制EGFR的蛋白水平,进而抑制EGFR信号通路并下调IL-6的表达,从而抑制食管鳞癌细胞的生长。在肿瘤微环境中,MSA能够减少巨噬细胞以及中性粒细胞的浸润同时增加Granzyme B的表达,且MSA对微环境的调节作用依赖于IL-6。