【摘 要】
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硫化叶菌是极端嗜热古菌,其最适生长温度约为80℃,最适生长pH约为3.为了揭示极端嗜热古菌DNA复制机制,该文对硫化叶菌中的一个B家族DNA聚合酶—聚合酶B1(polB1)进行了较为细
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硫化叶菌是极端嗜热古菌,其最适生长温度约为80℃,最适生长pH约为3.为了揭示极端嗜热古菌DNA复制机制,该文对硫化叶菌中的一个B家族DNA聚合酶—聚合酶B1(polB1)进行了较为细致的生化分析.通过SDS-PAGE分离及复性处理,在芝田硫化叶菌细胞提取液中发现了分子质量分别约为100和70kD的DNA聚合酶,前者的聚合活性远大于后者.根据其分子量、柱层析行为、部分纯化产物的性质,100kD蛋白很可能是polB1.接着对硫磺矿硫化叶菌基因组中已注释的三个B家族DNA聚合酶(polB1、B2和B3)基因进行了克隆并成功地表达了polB1和B3,但只有polB1能够稳定地表现出活性.同时,构建了一系列polB1突变体(包括外切活性或聚合活性缺陷突变体),初步确认了polB1外切中心和聚合中心的关键残基.该论文通过对polB1性质的分析,探讨了极端嗜热古菌DNA聚合酶的一些特点以及与之相应的独特的调控机制,所取得的结果有助于认识高温条件下DNA合成、乃至其它DNA代谢过程的机制.
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