【摘 要】
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自1996年美国PE公司推出世界第一台商品化的荧光定量PCR仪以来,高性价比和小型化一直是国内外研制实时荧光PCR仪的重要目标,而光电检测模块的优化是实现这个目标的重要内容。课
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自1996年美国PE公司推出世界第一台商品化的荧光定量PCR仪以来,高性价比和小型化一直是国内外研制实时荧光PCR仪的重要目标,而光电检测模块的优化是实现这个目标的重要内容。课题着眼于研制小型化的实时荧光PCR仪光电检测模块,主要研究内容包括光电检测光路设计,光纤和反应池的光学模拟仿真,光电检测电路系统设计及荧光检测实验分析四部分。
本研究采用ZEMAX光学设计软件设计了PCR荧光检测光学系统,包括LED光源与光纤的耦合系统设计、激发光路系统设计、荧光采集透镜设计及检测光路设计,并对整体光路系统进行了优化、优化后,光纤耦合系统的耦合效率达到了88.78%,在激发光路中,样品池底接收到的光效率为11.02%,在荧光收集光路中,对入射光进行滤波处理,荧光能量衰减了1.9%,实现了高效的光学滤波功能;采用蒙特卡罗方法在MATLAB环境下模拟分析了光子在样品池中的运动情况,得到样品对入射光子的吸收率为70.7%;设计了LED驱动电路和PMT光电检测预处理电路,并且设计了PMT的固定装配系统,使光学系统处于一个封闭的环境中,避免了杂散光干扰,提高了PCR光学系统的信噪比:最后采用PMT对加入了SYBR Green I荧光染料的小牛胸腺DNA样品进行检测,PMT检测结果表明随着样品浓度的增加,PMT电流输出随之增大,其与PMT增益拟合曲线的斜率也随之增大。设计了结构紧凑简单、光学效率高的光学系统;采用体积小、价格低的LED光源减小了光电模块的体积,提高了检测系统的性价比;采用PMT固定装配系统进行光电检测有效避免了系统中杂散光的干扰,提高了PCR光学系统的信噪比,初步研制出适用于便携式PCR仪的光电检测模块。
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