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目的 本实验设计为在体外利用流体剪切力模拟咬合创伤,对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)给予不同浓度的FN,在不同时段测量HPDLF的COX-2 mRNA表达量,以期模拟HPDLF在口腔内,特别是在有咬合创伤的情况下FN对其生物学行为的影响,为揭示咬合创伤的机制提供理论依据。 材料与方法 一、标本来源 收集中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科因正畸矫治需要拔除的健康年轻恒牙,组织块法进行原代培养,获得实验所需的HPDLF。 二、HPDLF原代培养和鉴定 组织块法原代培养HPDLF,经免疫细胞化学检测呈抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性。证明细胞来源于中胚层。以第3代的细胞作为研究对象。 三、样本处理 实验先分为A、B两组,A组为利用摇床施加剪切力培养;B组为静态培养。A、B两组中又分别分为加入FN 0ug/ml(对照)、20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml四组,每组四孔。无血清培养6h,12h。水平摇床转速定为35r/min。 四、半定量RT-PCR 1、提总RNA。 2、RT-PCR反应。 3、RT-PCR产物电泳分析。