体内和体外不同发育阶段小鼠胚胎内部活性氧(ROS)的测定

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liaozhouyi
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体内、外环境产生过量的活性氧可对胚胎细胞造成毒性损伤,活性氧引起的氧化损伤可导致胚胎发育阻滞,本实验研究活性氧在胚胎体外发育阻滞中的作用。以昆明小鼠的早期胚胎为研究对象,以mCZB培养液为基础培养液,用2’,7’-二氯荧光素双乙酸盐(DCFH-DA)和氢化溴乙非锭(HE)两种染料测定胚胎内部的活性氧(ROS)含量,来探讨活性氧(ROS)与小鼠胚胎体外发育阻滞之间的关系。利用2’,7’-二氯荧光素双乙酸盐(DCFH-DA)来测定过氧化氢(H2O2)的含量,以此对小鼠体内和体外不同发育阶段胚胎内部H2O2的含量以及相同发育阶段H2O2的含量进行比较。我们测量的结果是体内2-细胞早期、2-细胞晚期、4-细胞期、桑椹胚、囊胚胚胎的DCF荧光密度分别是:31.33,32.60,39.55,28.73和25.79,;体外2-细胞早期、2-细胞晚期、4-细胞期、桑椹胚、囊胚胚胎的DCF荧光密度分别是:38.56,45.49,41.13,30.2和29.21。通过结果分析可知:体外培养胚胎中的H2O2含量从2-细胞早期到2-细胞晚期之间是逐渐增加的,然而从2-细胞晚期以后又逐渐下降;通过SPSS统计软件分析可知,体外培养的2-细胞早期和晚期胚胎中的H2O2含量与体内相同发育阶段的胚胎相比差异显著,而4-细胞期,桑椹胚,囊胚差异不显著。利用氢化溴乙非锭(HE)测定小鼠体内和体外不同发育阶段胚胎内部超氧阴离子(O2-)的含量。我们测量的结果是体内2-细胞早期、2-细胞晚期、4-细胞期、桑椹胚、囊胚胚胎的EB荧光密度分别是52.92,50.77,48.84,39.96和30.36;体外2-细胞早期、2-细胞晚期、4-细胞期、桑椹胚、囊胚胚胎的EB荧光密度分别是74.85,82.62,82.98,81.28和54.09。体内胚胎的O2-含量从2-细胞早期到囊胚是逐渐减少的。通过SPSS统计软件分析可知,体内2-细胞早期、2-细胞晚期和4-细胞期与囊胚和桑椹胚之间差异显著,且桑椹胚与囊胚之间差异也显著。体外培养的2-细胞早期,2-细胞晚期,4-细胞期胚胎和桑椹胚中的EB荧光密度较高,且它们之间差异不显著,但它们与囊胚均差异显著。比较相同发育阶段体内和体外的胚胎,它们之间均差异显著。所以我们得出结论:1:体内胚胎中的ROS含量低于体外培养胚胎中的ROS含量;2:体外培养胚胎中H2O2含量在2-细胞晚期最高,这可能是导致小鼠2-细胞期胚胎发育阻滞的原因。
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