【摘 要】
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高价值的蛋白和多肽药物或试剂不仅能够创造高效的经济价值,对人民生命健康和科学发展也带来实际用处,但是目前主要依靠动物细胞和微生物发酵生产,成本高昂,生产流程复杂难于
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高价值的蛋白和多肽药物或试剂不仅能够创造高效的经济价值,对人民生命健康和科学发展也带来实际用处,但是目前主要依靠动物细胞和微生物发酵生产,成本高昂,生产流程复杂难于快速发展。叶绿体普遍存在于植物细胞中,能进行光合作用,是一种重要的细胞器,由于它有自身的一些优点与特性,很适合于遗传转化,因此,在叶绿体内表达高价值的蛋白和多肽药物或试剂。在高等植物的叶绿体转化体系中,已有十多种植物获得了成功,在藻类细胞中,也对莱茵衣藻、杜氏盐藻、小球藻等几个种类进行了研究。本文选用了还没报道过的塔胞藻为研究对象,为研究塔胞藻叶绿体表达系统进行了前期载体构建的几项工作。(1)采用改良的CTAB法,提取了塔胞藻总DNA,设计引物,得到了目的条带;以提取的DNA为模板,根据Pyramimonas parkeae叶绿体基因组序列设计引物,扩增同源片段chlL和chlN,扩增得到了chlL基因。(2)研究了氯霉素、新霉素、链霉素、氨苄青霉素、壮观霉素、Zeocin和G-4187种常用抗生素对塔胞藻的敏感性。结果表明,氨苄青霉素、硫酸新霉素、硫酸链霉素和壮观霉素对塔胞藻没有抑制作用,G-418在高浓度下作用明显,Zeocin和氯霉素作用很明显。本文选用Zeocin对应的ble基因做为筛选标记基因。(3)根据Pyramimonas parkeae叶绿体基因组序列,通过合成atpA启动子和rbcL终止子,以ble基因为筛选标记,将启动子和终止子构建在ble基因的两端,以pBluescript质粒为基础,构建pBABL载体,转化大肠杆菌BL21,用氨苄青霉素和Zeocin筛选,得到了转化菌,表明ble基因在atpA启动子和rbcL终止子的作用下得到了表达。
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