【摘 要】
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近年来,我国水产养殖业迅速发展,成为世界水产养殖大国。但由于高密度集约化养殖方式使得水产养殖病害发生日益频繁,而细菌对水产养殖的影响尤为严重,因此建立灵敏度高、准确性好、快速的检测方法就尤为重要。表面等离子共振(SPR)生物传感技术作为一种快速、高效的检测方法已在食品、医学、生物等领域得到广泛应用。本课题已成功建立SPR生物传感器技术对水产致病菌的检测,旨在扩大SPR的应用范围,为水产疾病的早期诊
【基金项目】
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国家自然科学基金(NO.30972281,31001136); 福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划(闽教科[2007]20号); 集美大学创新团队基金项目(NO.2010A001)
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近年来,我国水产养殖业迅速发展,成为世界水产养殖大国。但由于高密度集约化养殖方式使得水产养殖病害发生日益频繁,而细菌对水产养殖的影响尤为严重,因此建立灵敏度高、准确性好、快速的检测方法就尤为重要。表面等离子共振(SPR)生物传感技术作为一种快速、高效的检测方法已在食品、医学、生物等领域得到广泛应用。本课题已成功建立SPR生物传感器技术对水产致病菌的检测,旨在扩大SPR的应用范围,为水产疾病的早期诊断和及时防御打下基础。本课题主要研究内容如下:(1)将抗体偶联在CM5芯片上建立直接SPR法达到对嗜水气单胞菌B11的直接检测,对偶联抗体缓冲液的p H、抗体浓度和再生液进行优化,并对重复性、特异性和敏感性等参数进行评估,得出嗜水气单胞菌的检测限为4.6×10~4 cfu/m L。且重复性好,特异性强,可用于实际样品的检测。(2)为提高检测灵敏度,本实验建立双抗夹心法对嗜水气单胞菌B11进行检测,优化再次加入的多抗的进样浓度、时间和流速,根据优化结果对嗜水气单胞菌进行检测,同时在重复性、特异性和敏感性等参数进行评估。得出嗜水气单胞菌B11的检测限为6.3×10~3cfu/m L,且重复性好,特异性强,可用于实际样品的检测。(3)本实验建立双通道法对嗜水气单胞菌B11和爱德华氏菌B79进行检测,即分别在两个通道偶联嗜水气单胞菌和爱德华氏菌的抗体,通入两种菌的混合液进行检测,得出嗜水气单胞菌B11和爱德华氏菌B79的检测限分别为6.6×10~4 cfu/m L和1×10~5 cfu/m L,且特异性强、重复性好,能够用于实际样品检测中。
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