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目的多发性内分泌腺瘤2型(Multiple endocrine neoplasia type 2,MEN2)是一种以甲状腺、肾上腺髓质和甲状旁腺神经内分泌细胞发生增生或瘤变的常染色体显性遗传病。对ret基因突变的检测有助于此病的早期诊断和发现致病基因携带者,筛查阳性者给予早期干预可明显改变其临床预后。本文通过对一个MEN2A家系进行ret基因突变检测,以明确引起该家族致病的基因型,并通过ret原癌蛋白的免疫组化染色,观察ret蛋白在此家系甲状旁腺腺瘤组织中的表达情况。方法研究对象为一个MEN2A家系的19名家系成员。1.对19名家系成员ret基因的第10和11外显子进行扩增,将PCR产物纯化后进行双向测序,测定序列结果通过互联网在NCBI网站上的BLAST程序与ret基因的DNA和cDNA序列进行比较,如果显示异常,则进一步与人类基因突变数据库(HGMD)进行突变基因比较查询,仍显示突变者,重复测序4次。2.通过免疫组化S-P法,比较此家系中一名MEN2A患者甲状旁腺腺瘤组织和单纯甲状旁腺腺瘤患者腺瘤组织中ret蛋白的表达差异。3.该家系19名成员均进行甲状腺、甲状旁腺、肾上腺B超和骨密度的检查以及血钙、血磷、癌胚抗原和甲状旁腺激素的检测,以了解基因型与临床表型的关系,并寻找新的MEN2A患者。结果1. ret基因第11外显子的14994位核苷酸正常情况下为纯合T。序列分析表明,该家系中MEN2A先证者(II-9)为T-C杂合,634号编码子TGC突变为CGC ,其对应氨基酸由半胱氨酸替换为精氨酸(Cys634Arg);15165位核苷酸正常情况下为纯合G,该先证者为G-A杂合,691号编码子呈GGT-AGT的单核苷酸多态性,其对应氨基酸由甘氨酸替换为丝氨酸(Gly691Ser)。对先证者哥哥(II-5)、姐姐(II-7)和侄子(Ⅲ-6)ret基因的全部测序结果与先证者相同。家系成员(Ⅲ-5)仅691号编码子呈GGT-AGT的单核苷酸多态性。其余家系成员第11外显子未见异常,全部家系成员第10外显子均未见异常。2.免疫组化结果显示:1名MEN2A患者(II-5,先证者哥哥)甲状旁腺腺瘤组织的ret阳性细胞数及着色程度明显高于单纯甲状旁腺腺瘤患者。3.经B超检查还发现家系成员(II-5)双侧甲状腺,一侧肾上腺及一侧甲状旁腺有实性占位病变,成员(II-9)双侧甲状腺及一侧肾上腺有实性占位病变,成员(Ⅲ-6)双侧甲状腺,一侧肾上腺和一侧甲状旁腺有实性占位病变,成员(II-7)双侧甲状腺,双侧肾上腺和一侧甲状旁腺有实性占位病变,成员(Ⅲ-5)仅有甲状腺多发性小结节。另外有3名成员B超检查有异常,但所测定的基因序列无基因突变。结论1. ret基因序列分析表明:此家系中4名MEN2A患者(II-5,II-7,II-9,Ⅲ-6)均存在ret原癌基因第11外显子Cys(TGC)634Arg(CGC)错义突变和Gly(GGT)691Ser(AGT)的单核苷酸多态性共存,无此2位点基因突变的成员无发病,显示ret原癌基因第11外显子Cys(TGC)634Arg(CGC)错义突变和Gly(GGT)691Ser(AGT)的单核苷酸多态性共存为该家系MEN2A患者的致病基因。2.成员(Ⅲ-5)仅存在ret原癌基因第11外显子Gly(GGT)691Ser(AGT)的单核苷酸多态性,可能为未发病的基因突变携带者,需密切观察和随访。3.和单发甲状旁腺腺瘤患者相比,MEN2A患者甲状旁腺腺瘤组织原癌基因ret蛋白表达可能增强。4.本研究中,经临床检查与致病基因联合筛查,在该家系新诊断了2名MEN2A患者,提示临床检查与致病基因联合筛查有助于发现家系中新的患者,可为早期诊断和治疗提供帮助。