C2基因是在肝癌研究过程中克隆出的人源性真核细胞蛋白翻译起始因子。初步研究可见C2基因有与抑癌基因p53相似的功能并在蛋白质翻译水平抑制细胞生长，可确保蛋白翻译过程的准确性，维持核糖体框架平衡及转移效率，是一个具有抑制功能的蛋白翻译过程中的总监控分子。本文将已经构建的C2基因真核表达载体扩增，纯化，转染人胃癌细胞系SGC7901细胞，获得稳定高表达C2蛋白的人胃癌细胞株，并对C2基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响进行了初步探讨。主要内容及结果如下：1．免疫组化法结果表明，C2基因在胃癌、结肠癌组织中的表达率分别为 42.9％，35.0％，明显低于在两种恶性肿瘤相应癌旁组织的强阳性表达率， 分别为82.4％，68.4％，在人胃癌细胞系SGC7901细胞中表达减少或缺 如。2．对C2基因真核表达载体进行扩增，纯化，所得质粒浓度较高，纯度较好， 无RNA及蛋白质污染。HindⅢ和BamHⅠ双酶切对质粒进行鉴定，得到 一条5.4kb的载体片段和1.3kb的目的基因片段，表明C2基因在真核表 达载体pcDNA3的HindⅢ和BamHⅠ位点间插入。3．使用脂质体介导方法将C2基因和空载体pcDNA3分别转染SGC7901细 胞，经G418筛选，获得稳定转染的细胞。 第四军医大学硕士学位论文 4．免疫组化法显示 CZ基因转染的 SGC790细胞稳定有效地高表达 CZ蛋 白。Western印迹法和流式细胞分析法进一步证实CZ基因转染细胞稳定 高表达CZ蛋白。4 5．细胞计数法和NlT法绘制转染细胞生长曲线。结果可见，转染了CZ基 因的SGC7901细胞生长速度明显比转染了空载体的SGC7901细胞缓慢。 6．在体外的检测转染细胞成瘤性的平板克隆形成试验中CZ基因转染的 SGC7901细胞克隆形成率，平均为43．8％，低于转染了空载体的SGC7901 细胞的克隆形成率，平均为76．9％。在裸鼠体内的成瘤性实验中，CZ基 因转染的 SGC790细胞在裸鼠皮下形成肉眼可见的肿瘤结节的时间延 长，在相同时间内，裸鼠皮下形成的肿瘤结节的平均体积减小，分别为 ！．203cm‘和二．843cm’。以上结果说明 CZ基因转染 SGC7901细胞后在成 瘤速度和成瘤体积方面抑制了 SGC790细胞的恶性表型。 7．流式细胞分析仪检测了瞬间和稳定转染了 CZ基因的 SGC790细胞的细 胞周期。结果发现，在瞬间和稳定转染了该基因的 SGC790细胞的细胞 周期图中均可见凋亡峰，而且细胞的DNA阻滞期延长。透射电镜下可观 察到发生凋亡的CZ基因转染细胞。说明CZ基因细胞转染后，可抑制细 胞的恶性表型并可诱导细胞发生凋亡。 8．Mh’法在体外检测两种转染细胞对阿霉素、丝裂霉素、长春新碱三种化 疗药物的敏感性。转染了 CZ基因的 SGC790细胞对阿霉素和长春新碱 耐受性增高，对丝裂霉素耐受性无变化。：CZ基因在SGC7901细胞中低表达或缺如，将CZ基因转人SGC79（）细 胞使之稳定高表达CZ蛋白，CZ基因一定程度上抑制了人胃癌细胞的恶性 表型，诱导细胞发生凋亡，并可能改变细胞耐药性。