论文部分内容阅读
白及属(Bletilla Reichb. f.)是兰科(Orchidaceae)地生草本植物,具有较高的药用价值和观赏价值。其假鳞茎是一种传统的中药材,具有敛气、渗痰、止血、消痈等功效,白及属广泛分布于亚洲国家,其在中国共有四个种,分别是白及(Bletilla striata (Thunb.) H. G. Reichenbach)、华白及(Bletilla sinensis (Rolfe) Schltr.)、黄花白及(Bletilla ochracea Schltr.)和小白及(Bletilla formosana (Hayata) Schltr.)。白及种子的自然萌发率低,加之人类对生境的破坏和过度的采挖,白及植物野生资源遭到严重破坏,对其野生资源的保护迫在眉睫。而本研究为白及野生资源的开发利用和保护提供了理论依据。本论文首先通过单因素和多因素对白及假鳞茎的诱导进行研究。实验结果表明：MS做为基础培养基,最适宜白及假鳞茎的诱导,活性炭浓度为1.0 g/L时对假鳞茎促进的效果最佳；不同添加物、NAA、6-BA以及PP333对于假鳞茎的诱导率影响大小依次为：添加物>PP333>6-BA>NAA;对于假鳞茎粒径影响大小则为：6-BA>PP333>添加物>NAA。综合以上白及假鳞茎诱导最佳培养基为：MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.8 mg/L+PP3330.5 mg/L+香蕉泥10.0 g/L+活性炭1.0 g/L。本论文还利用序列相关扩增多态性(SRAP)分子标记建立白及属SRAP-PCR反应体系,对影响该体系的DNA模板、引物、Taq酶和dNTP等因素进行优化,并对22份白及属样本进行了鉴定。确定了适合白及属的20μL SRAP-PCR反应体系：10×Taq酶的配套缓冲液(10×buffer) 2.0μL, MgCl2 1.5 mM,Taq酶1.5 U, dNTP 0.4 mM,正、反引物各0.4μM, DNA模板20 ng。利用筛选出的12对引物对22份样本进行分析,共筛选出189条多态性条带,表明白及属具有较高的遗传多样性,通过UPGMA聚类法能够把白及、小白及和黄华白及良好的区分开来,四份待检品经鉴定为白及。本文最后通过SRAP分子标记探讨了12个白及野生居群的遗传多样性和居群遗传结构。实验结果表明,18对SRAP引物对对153份样本扩增,获得294条条带,其中多态性条带有240条(81.63%),白及物种有着丰富的遗传多样性(PPB=90.48%,H=0.3494,I=0.5096),遗传分化指数Gst=0.2609,白及居群间存在中等水平的遗传分化。UPGMA聚类分析中12个居群分为三大支,我国东部江苏南京、江苏镇江、安徽宣城和浙江杭州4个居群聚为一支,中部湖北、湖南、江西以及贵州7个居群聚为一大支,西部云南文山单独聚为一支。通过Mantel test检测,地理距离和遗传距离之间有明显正相关性(r==0.6329；p<0.0001)。本文为白及野生种质资源的就地保护和迁地保护提供了参考依据。