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目的:1、建立耐Enzalutamide前列腺癌ENZ-R-LNCaP细胞模型,并验证雄激素受体剪切变异体7(AR-V7)在ENZ-R-LNCaP细胞的表达。2、免疫组化验证AR-V7在低、中、高危前列腺癌标本中的表达情况。方法:1、于含活性炭/葡聚糖处理过的胎牛血清培养基培养前列腺癌LNCaP细胞,其中加入0.1、0.3、1.0uM三个不同浓度二代雄激素受体拮抗剂Enzalutamide(MDV3100),进行连续传代培养,建立耐Enzalutamide的ENZ-R-LNCaP细胞模型,倒置显微镜下观察LNCaP细胞在无雄激素下的生长状态以及其形态的变化,并运用western blot技术检测前列腺癌LNCaP细胞AR-FL及AR-V7蛋白表达变化。2、根据2015年欧洲泌尿外科学会(European Association Of Urology,EUA)标准,收集南昌大学第一附属医院泌尿外科前列腺癌术后临床组织标本40例,其中低危10例,中、高危组各15例,运用免疫组化染色方法,分别检测在不同危险度前列腺癌标本AR-V7蛋白的表达。结果:1、LNCaP细胞在活性炭/葡聚糖处理过的胎牛血清培养液+Enzalutamide中,初期(3代)生长受到明显抑制,表现为细胞难以贴壁,出现大量细胞死亡,仅少数存活,开始向周围伸出突起;约传至9代后可见细胞逐渐向周围伸出较多突起,并相互联系成网状,细胞呈自分泌状态;当继续培养到12代时,细胞不再呈自分泌状态,随着细胞继续传代培养4个月后LNCaP细胞呈铺开样生长,且细胞状态及形态发生了变化,细胞体积变小,呈圆形或梭形,细胞突触较少。2、western blot检测AR-FL和AR-V7:加0.1,0.3,1.0uM Enzalutamide(MDV3100)的三个实验组与未加Enzalutamide组比较,AR-V7蛋白表达呈显著上调(P<0.05),且在不同剂量下表达差异明显(P<0.05)。3、免疫组化显示:结果示AR-V7绝大多数表达于细胞核内,仅少量表达于胞质中;40例前列腺癌标本AR-V7有19例阳性表达,总阳性表达率47.5%(19/40),其中低危阳性表达为20%(2/10)、中危阳性表达40%(6/15)及高危阳性表达73.3%(11/15),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、在含活性炭/葡聚糖处理的胎牛血清培养液中加入雄激素受体阻断剂Enzalutamide,对前列腺癌细胞LNCaP进行连续传代培养,可建立耐Enzalutamide的ENZ-R-LNCaP细胞模型。2、AR-V7的表达量可能与前列腺癌危险因素等级相关,并可能与前列腺癌去势抵抗的发生、进展密切相关。