论文部分内容阅读
【目的】系统评估结核患者和健康人群的免疫功能。【方法】收集23例健康志愿者和38例结核患者的新鲜外周血,通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs)。流式细胞术评估细胞活化分子、抑制性分子和细胞功能。电化学发光法检测血清中IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α浓度。【结果】结核患者体内IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α分泌均显著高于健康对照。结核患者效应细胞功能总体呈现减弱趋势,包括CD4+、CD8+、NK、DC、Mon。然而,调节T细胞(Tregs)以及结核特异性的CD4+、CD8+和NK细胞功能显著增强。CTLA-4、TIM-3、TIGIT、PD-1在结核患者CD4+、CD8+、NK和Tregs表达显著高于健康志愿者。【结论】结核患者免疫功能变化涉及多种炎症因子、细胞和分子,呈异质性。结核患者细胞功能失衡,效应细胞功能明显减弱,抑制性细胞功能增强。【目的】研究TIGIT如何影响活动性结核中调节性T和效应T细胞的作用及机制。【方法】纳入85例健康志愿者和52例结核患者,使用流式细胞仪检测TIGIT的表达与Tregs和CD4+效应细胞(Teffs)细胞活化、增殖的关系。使用TIGIT Fc融合蛋白或CD155融合蛋白或对照Ig G与结核患者PBMCs共同孵育,观察封闭或激活TIGIT信号通路后对Tregs和Teffs细胞活化、分泌细胞因子的能力及增殖功能的影响。最后,阻断CD4+T细胞的TIGIT信号通路,观察巨噬细胞控制Mtb生长的能力【结果】结核患者TIGIT在Tregs上高表达且与Tregs的活化和功能正相关。单独阻断TIGIT信号通路可以降低Tregs的功能,包括IL-10的分泌和增殖功能,而对Teffs功能没有作用。尽管阻断TIGIT对Teffs没有影响,封闭TIM-3信号通路可以恢复Teffs功能。此外,阻断CD4+T细胞的TIGIT途径增强了巨噬细胞控制Mtb生长的能力。【结论】CD4+T细胞上表达的TIGIT很可能主要通过Tregs而不是Teffs在结核感染中发挥作用。【目的】研究抑制性分子对T-SPOT结果的影响。【方法】纳入32例健康志愿者、24例结核T-SPOT高反应(TBAg/PHA≥0.3)和20例结核T-SPOT假阴性/低值(TBAg/PHA<0.3)患者,收集新鲜外周血,使用流式细胞仪检测CD4+、CD8+和NK细胞功能和TIM-3、PD-1的表达。在结核T-SPOT假阴性/低值PBMCs中加入TIM-3和PD-1封闭抗体共同孵育,观察封闭信号通路后对T-SPOT结果的影响。【结果】结核患者非特异性CD4+、CD8+和NK细胞功能均显著低于健康对照,T-SPOT高反应患者与T-SPOT低反应患者无差别。然而,T-SPOT高反应患者结核特异性CD4+、CD8+和NK细胞功能强于T-SPOT假阴性/低值患者。T-SPOT假阴性/低值组CD8+PD-1+、NK PD-1+和NK TIM-3+的表达显著高于T-SPOT高反应性患者。联合封闭TIM-3和PD-1信号通路均可部分提高IFN-γ分泌水平和T-SPOT斑点计数。【结论】TIM-3和PD-1的过表达可导致T-SPOT假阴性/低值,封闭TIM-3和PD-1信号通路可以部分纠正T-SPOT假阴性和低比值,提高T-SPOT准确性。