研究目的:结直肠癌是最常见的癌症类型之一,也是全球癌症死亡的第三大主要原因。据估计,全世界每年有超过130万人受到结直肠癌的影响。结肠直肠癌造成的全球威胁正在增加,这主要是由于人口老龄化以及发达国家和发展中国家越来越多地采用西化膳食。如今,在临床实践中,手术、化学疗法和放射疗法等是很有前途的治疗方法,因为它可导致治疗的良好反应,改善患者的生活质量并延长寿命。常见的化疗药物均发挥着强大的治疗作用;然而,耐药性和毒副作用限制了这些药物临床的应用。化疗后,通常会导致患者的出现不良反应,生活质量降低。以及耐药性的出现。某些肿瘤如结肠癌、卵巢癌和肺癌,对临床化疗药物的反应并不令人满意。目前,草药或天然化合物,或者作为单一疗法使用,或者与常规化疗药物联合使用,已被报道在治疗各种癌症方面发挥越来越重要的作用。扁蒴藤素是抗类风湿关节炎中药过山枫的最主要的活性药效物质之一。研究报道扁塑藤素具有多种广谱药理活性,抗炎、免疫调节作用。但扁塑藤素作为活性药物作用于肿瘤细胞的分子机制,仍然没有得到较为明确的探讨。本实验选取了结直肠癌SW480细胞,来研究扁塑藤素诱导其凋亡的潜在机制。这说明扁塑藤素可能是一种潜在治疗结直肠癌的药物,本研究为结直肠癌的治疗提供新的理论依据和药物作用靶点。研究方法:使用不同浓度的扁塑藤素处理结直肠癌SW480细胞后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,利用MTT法检测细胞活力变化。分别利用PI单染和PI及Annexin V-FITC双染法通过流式细胞仪检测SW480细胞周期和凋亡的变化。用DAPI细胞染色法,在荧光显微镜下观察细胞凋亡的变化。用DCFH-DA染色通过流式细胞仪检测细胞内ROS变化。用活性氧清除剂NAC和细胞自噬抑制剂3-MA预处理SW480细胞1h,加入扁塑藤素处理细胞,用MTT法染色检测细胞活力变化,用WB检测细胞自噬的相关蛋白以及AKT/GSK-3β信号的变化。研究结果:1.MTT法检测显示,随着扁塑藤素浓度的增加,SW480细胞存活率明显下降;在倒置显微镜下观察到,扁塑藤素以浓度依赖的方式明显增加了SW480细胞的死亡数量。2.流式细胞术结果显示,扁塑藤素可显著增加G0/G1期细胞比例,且呈浓度依赖性;同时,WB结果显示,扁塑藤素可降低SW480细胞中Cyclin D1的表达,增加p21的表达。3.DAPI染色结果显示,在荧光显微镜下,随着扁塑藤素浓度的增加,SW480细胞的蓝色荧光增强;流式细胞术结果显示,扁塑藤素可诱导SW480细胞凋亡和ROS生成,且呈浓度依赖性;WB结果显示,扁塑藤素可增加SW480细胞中PARP剪切体的表达。4.WB结果表明扁塑藤素可使SW480细胞p-AKT(ser473)的表达量降低,p-GSK3β(ser9)的表达量降低,NAC预处理可逆转这种趋势。5.WB结果显示,扁塑藤素上调了SW480细胞中LC3B-II的表达,而NAC预处理则相反;此外,3-MA预处理可显著降低扁塑藤素对SW480细胞的凋亡和生长抑制作用。研究结论:虽然扁塑藤素具有多种抗肿瘤活性,但其对结肠癌细胞株的作用及潜在的作用机制尚未被探索。结果表明,扁塑藤素能有效抑制细胞生长,在G0/G1期介导SW480细胞周期阻滞,促进SW480细胞凋亡。此外,扁塑藤素可促进SW480细胞内ROS水平升高,并通过ROS抑制细胞内的AKT/GSK-3β信号通路以及激活凋亡性自噬来诱导细胞凋亡。本研究结果说明扁塑藤素可能是一种潜在的治疗结直肠癌的药物,为结直肠癌的治疗提供新的理论和药物作用靶点。