【摘 要】
：
人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)为近年来发现的一种新的乳腺组织特异性蛋白,其基因仅在乳腺中表达,在乳腺癌中过度表达,可能是首次证实的具有乳腺器官特异性的肿瘤标
论文部分内容阅读
人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)为近年来发现的一种新的乳腺组织特异性蛋白,其基因仅在乳腺中表达,在乳腺癌中过度表达,可能是首次证实的具有乳腺器官特异性的肿瘤标志物。大多数研究结果显示hMAM是一种前景良好的乳腺癌标志物,在乳腺癌的早期诊断方面具有重要意义。目的:构建hMAM原核高效表达载体,建立hMAM重组蛋白的纯化工艺。通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,以期为医护人员早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法:1.自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至pGEM-T载体中,DNA测序鉴定后,用限制性内切酶切下目的基因,与相应酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以IPTG诱导在大肠杆菌M15[pREP4]中表达,SDS-PAGE分析表达结果。2.发酵诱导表达DHFR-hMAM融合蛋白,所获得的包涵体蛋白经超声破菌、洗涤、尿素变性溶解、Ni2+螯合亲和层析、透析复性、离子交换层析等系列过程纯化目的蛋白。HPLC检测分析蛋白样品纯度,Bradford法测定纯化蛋白浓度。3.利用纯化出的DHFR-hMAM融合蛋白免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,对单克隆抗体进行亚类分型鉴定,利用Western blotting鉴定单克隆抗体与特异抗原的反应特性,并通过观察抗体与其他肿瘤组织切片免疫组化染色情况对其进行特异性分析。结果:1.提取的人乳腺癌组织总RNA经RT-PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物大小与预期hMAM cDNA碱基长度相符。对pQE40-hMAM重组质粒序列分析表明,插入片断的序列与GenBank收录的hMAM基因编码序列一致。在IPTG的诱导下,
其他文献
文章选择了19世纪交响曲体裁演变过程中最具代表性的4位作曲家及其典型代表作为研究体例——贝多芬的《第九交响曲》、柏辽兹的《罗密欧与朱丽叶》、李斯特的《浮士德交响曲
目的:研究短疗程体外反搏与长疗程体外反搏治疗慢性稳定型心绞痛的疗效。方法:将287例慢性稳定型心绞痛患者随机分为对照组(Ⅰ组n=95)、短疗程体外反搏治疗组(Ⅱ组n=97)、长
2017年10月14日,世界医学协会（World Medical Association）在美国芝加哥通过了最新修改版的《日内瓦宣言》。1948年世界医学协会将有着2 500余年历史的《希波克拉底誓词》修改
牛顿力学的建立和发展与整个物理学的发展有着密切的关系,反映了继承与发展、批判与超越的人类认识的发展。牛顿力学是现代物理学和工程技术的基础,改变和影响人的思维方式,
会计管理是高校财务管理中的一项基础性工作,加强会计管理对规范高校会计工作行为、提高会计信息质量、促进财务基础工作精细化开展起着重要作用。本文分析探讨了高校基层会
文章分析了我国房地产企业所表现出的财税特征，同时阐述了税收筹划以及土地增值税等涵义，最后结合多年的工作实际，总结了一些房地产企业土地增值税的纳税筹划做法。旨在规范房地
1945年国共两党对东北的争夺,与抗战中两党实力的消长有直接关系,两党采取不同的策略和措施也决定了日后东北整体形势的变化,东北不仅仅是国共两党问题,而且在争夺过程中渗透
股权激励是一种能够解决委托代理问题的长效激励方式,在上市公司的治理中发挥了重要的作用。在现代企业股权分置改革和企业制度改革的发展下,越来越多的上市公司开始应用股权
随着世界经济的飞速发展与可持续发展战略的推动,航空运输业在经济结构、环境与能源安全中的作用越来越重要,而航空燃料与地面以上交通方式所用的燃料有很大差别,飞机在新燃料的选择上十分有限制。如今用于陆地运输业的能源,例如:太阳能,燃料电池等其他能源在短时间内应用于飞机运输业是非常困难的。使用以甘油三酯为原料例如动植物油或农林废弃物制备生物航空喷气燃料的第二代生物燃料技术,其产品与化石航空煤油性质与成分接
随着我国高速公路建设事业的迅猛发展,山区高速公路的数量近年来持续增加。然而,山区独特的地形地貌、地质条件,使得山区高速公路往往存在较多的连续纵坡路段,表现为连续下坡