中华鳖(Trionyx sinensis)是我国特种水产养殖品种之一,除宁夏、西藏等条件比较极端地区没有分布之外,在我国其他地区均有中华鳖的报道。上世纪70年代以前,市场上的鳖还以捕捞的野生中华鳖为主。自上世纪90年代中华鳖进入大规模养殖期后,鳖病的发生开始愈加频繁;无论细菌病、病毒病还是寄生虫病,都可对中华鳖的养殖业造成严重打击。因此,中华鳖疾病的研究对疫病防控具有重大指导意义。本研究以一种中华鳖细菌性结节病为课题,经流行病学调查探明了结节病发病的基本情况;传统鉴定方法和现代分子生物学方法对疾病的病原进行了分析及鉴定;对分离出的病原进行了药敏学试验;结合实际养殖情况为结节病的防控提供了可行性预防方案。本次研究主要取得以下几项结果:1中华鳖结节病的发病情况调查通过走访咨询、实地考察、资料查询、疾病化验室检查、数据统计等方式,对结节病的发病情况进行调查。调查发现,结节病在山东聊城中华鳖养殖区域内普遍;疾病发生于池塘,温室很少发病。温室和池塘环境中温度和光照差异大,且转移过程中未做任何预防措施。自温室转到池塘发病后,直至入冬均有此病的发现;7-10月份期间气温高,发现数量比较多;发病率在11%左右,死亡率较低。池塘巡查鳖中外伤占比高达90%。养殖区的水质除氨氮含量严重超标外,其他指标均正常。病鳖可见症状主要有厌食、身体浮肿、底板发白、精神萎靡。解剖发现结节病在肺、肝、四肢常见,四肢处结节病可见明显肿胀;心、肠系膜、头处结节偶有见到;结节内包含豆渣样物质和脓液,有恶臭。肺、肝、心部位的结节病灶周围组织变硬,肠系膜较正常,四肢肌肉处结节周围组织松散。2中华鳖结节病病原筛查与鉴定无菌条件下对分离的结节内容物进行病原的筛查。通过镜检检测寄生虫和真菌,通过攻毒和电镜检测病毒,通过分离纯化以及攻毒实验检测细菌。检测未发现寄生虫、真菌、病毒;经多次分离、纯化操作获得两种优势菌株DM1和DM2。依据科赫法则设计回归感染试验,实验组采用每日腹腔注射和浸泡两种处理方式;浸泡组均未发病,DM2注射组未发病。DM1注射组出现死亡和结节病,细菌浓度为2.877×10~1-2.877×10~5 CFU/mL,DM1注射组从低浓度到高浓度的死亡率分别为0%、25%、40%、70%、100%。实验进行18天,除最高浓度全部死亡并未发现结节外,其他实验组体内均发现结节。16S rRNA系统进化树结果显示DM1菌与鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)聚为一支,而且相似度为100%;后经沙门氏菌生理生化实验确定病原菌为鼠伤寒沙门氏菌。3病理组织学观察病理切片显示,中华鳖结节分包膜和内部嗜酸性凝固性坏死两部分。肺和肝结节包膜外部组织可见细胞、结缔组织严重增生;四肢肌肉处结节外部呈正常肌肉组织和坏死肌肉组织交织。结节包膜由纤维结缔组织形成;肺、肝、四肢与心肌肉处结节包膜厚;肠系膜组成有结缔组织,其包膜较薄。肺、肝、肠系膜处结节内部均为嗜酸性凝固性坏死,肠系膜结节内部为嗜酸性凝固性坏死和结缔组织交织;心肌处的结节内部可见类单层柱状上皮细胞形成的绒毛状组织。4鼠伤寒沙门氏菌来源分析及药敏试验对饲料、水质、淤泥三者采用鼠伤寒沙门氏菌选择性培养基进行来源筛查,结果发现底部淤泥中含该菌最多。34种抗生素药敏结果显示分离出的鼠伤寒沙门氏菌对丁胺卡那、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星等14种药物敏感;对呋喃唑酮、头孢氨苄表现中度敏感;对诺氟沙星、利福平、氨苄西林等18种药物表现耐药。本实验通过收集当地投放苗、养殖生产、清塘等资料以及病原来源分析,推断导致该结节病的发生有以下几个因素。鳖苗种质下降,温室转池塘过程中防应激反应工作没做好,密度过大导致外伤严重,造成中华鳖抵抗力下降;由于塘底淤泥过厚而鼠伤寒沙门氏菌偏多;最终导致中华鳖结节病的发生。