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目的:本研究通过检测健康对照组、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)敏感组及耐药组患者血液中MTX及代谢产物甲氨蝶呤多聚谷氨酸盐(methotrexate polyglutamate，MTXPG)的药物浓度水平的测定，同时测定参与药物转运代谢的相关蛋白及基因的表达或功能，如还原性叶酸盐载体（reduced folate carrier，RFC）、二氢叶酸还原酶(dihydrofolatereductase，DHFR)、P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance protein，MRP)、mdr1(multidrug resistance1)，以探讨耐药相关基因与RA患者服用MTX产生耐药性的可能机制及与中医证型的相关性，从而为提高RA治疗效果、克服MTX耐药提供新的思路与靶点。 方法:将符合纳入标准的患者，根据其病情活动度分为MTX敏感组、MTX耐药组，以流式细胞仪检测外周血淋巴细胞P-gp蛋白的表达及功能;以酶联免疫法吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法检测红细胞内MTX药物浓度;以聚合酶链氏反应(PolymeraseChainReaction，PCR)法检测外周血MRP、MDR1、RFC、DHFR基因mRNA的表达，中医上将患者分为寒湿阻络、湿热阻络、痰瘀痹阻、肝肾亏虚四型，比较各指标与中医证型是否具有相关性。并采用SPSS16.0软件进行统计学处理数据以分析数据间相关性。 结果:1、外周血单个核细胞P-gp的表达及功能:与正常对照组相比，MTX敏感组及MTX耐药组P-gp表达及功能增高，差异具有统计学意义(P＜0.05);与MTX敏感组相比，MTX耐药组P-gp表达及功能升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。2、MTX敏感组平均药物浓度明显高于MTX耐药组平均药物浓度（t=9.71，P＜0.05双侧）。3、MTX耐药组患者MPR mRNA表达量高于MTX敏感组，两者具有统计学差异（t=6.358，P＜0.05双侧）;MTX耐药组患者MDR1 mRNA表达量高于MTX敏感组，两者具有统计学差异（t=7.01，P＜0.05双侧);MTX耐药组患者DHFR mRNA表达量均值稍高于MTX敏感组，但无统计学意义（t=0.28P=0.78＞0.05）;MTX耐药组患者RFC mRNA表达量均值低于MTX敏感组，两者间具有统计学意义（t=6.12，P＜0.05双侧）。4、中医各证型与上述指标之间均无统计学差异。 结论:1、红细胞内MTX药物浓度与RA患者疗效明显相关。2、RFC的高表达可能是MTX耐药的形成机制。3、DHRF表达在RA患者MTX耐药形成中并无显著差异。4、MDR1高表达可能通过上调P-gp、MRP的表达，影响MTX药物的外排能力，从而参与了MTX耐药的形成机制。5、MTX耐药的指标与MTX耐药的指标与中医上述各证型无相关性。