GⅡ-4型诺如病毒P粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究

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目的:克隆诺如病毒(NVs)GⅡ-4型1991年至今五个不同年代变异株的P区基因,并表达、纯化其蛋白,即P粒子;通过分析不同P粒子与其受体——人组织血型相关抗原(HBGAs)之间的结合模式,以确定GⅡ-4诺如病毒感染的宿主范围,为防治GⅡ-4诺如病毒的感染提供科学数据。方法:选取五株不同年代GⅡ-4型诺如病毒变异株,分别克隆其ORF2区,以此为基础扩增P区并与PGEM-Teasy载体相连,得到重组质粒PGEM-Teasy-P。之后用BamH I和Not I双酶切将P区基因切下连接至PGEX-4T-1表达载体,得到PGEX-4T1-P表达质粒。利用GST原核表达系统经IPTG诱导、超声破碎细胞后表达P蛋白(此时带有GST蛋白标签)。利用琼脂糖凝胶4B对P蛋白进行纯化并用thrombin凝血酶去除GST标签以形成二十四聚体的P粒子。利用制备成功的P粒子、实验室现有的GⅡ-4型诺如病毒免疫家兔的血清,及从深圳收集的117份唾液标本,用酶免疫分析试验(EIA)测定五株变异株的P粒子与受体组织血型相关抗原(HBGAs)之间的结合模式。结果:1.成功构建了五株GⅡ-4型诺如病毒的PGEX-4T1-P表达质粒。2.制备了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株的P粒子,大小为38KDa。3.测定了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株P粒子与受体HBGAs之间的结合模式,Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型(O+)唾液结合,与O型非分泌型(O-)不结合,Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。结论:HBGAs与GⅡ-4型诺如病毒P粒子的结合呈现毒株特异性结合,Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型(O+)唾液结合,与O型非分泌型(O-)不结合,Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。
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