P38αMAPK在大鼠卵泡中的表达及功能研究

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本文主要从以下几个方面进行论述:  第一部分:P38αMAPK在雌性大鼠卵泡发育中的表达  目的:P38αMAPK信号通路在雌性生殖系统中起着重要的作用,然而在大鼠卵泡中的表达和功能还不是很清楚,本研究通过探索P38αMAPK在大鼠卵泡发育过程中是否表达,从而探究P38αMAPK在卵泡发育中的功能。  方法:随机选取成年雄性SD大鼠和成年雌性大鼠,按照1:2的比例交配,繁殖新生大鼠,分别收集2d、4d、8d、12d、16d、20d、30d的新生雌性大鼠的卵巢。通过免疫组化检测P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年龄段卵巢中的表达情况;通过western-blot检测P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年龄段大鼠卵巢中表达变化。  结果:P38αMAPK在卵泡细胞和颗粒细胞中持续表达,在不同卵泡卵母细胞中, P38αMAPK表达相对稳定,而p-P38αMAPK表达逐渐增强;在不同鼠龄的颗粒细胞中,P38αMAPK表达也相对稳定,而p-P38αMAPK表达呈现动态变化的趋势,随着卵泡的发育,在第12d、30d表达相对较少,而在第16d、20d表达相对较多;western-blot检测发现 P38αMAPK在卵巢中的表达相对稳定,而p-P38αMAPK表达是先增加随后减少的趋势,在16d、20d表达相对较多。  结论:P38αMAPK在大鼠卵泡发育中存在表达,且表达存在一定的时间效应,对卵泡发育可能有重要作用。  第二部分:探索P38αMAPK在卵母细胞中的定位与功能  目的:探究P38αMAPK在大鼠卵母细胞中的定位及功能。  方法:体外培养大鼠卵母细胞,通过免疫荧光的方式分别检测P38αMAPK,p-MK2,p-P38αMAPK在大鼠卵母细胞减数分裂不同时间段的表达定位情况;通过western-blot检测卵母细胞减数分裂不同时间段 p-P38αMAPK表达量变化;用P38αMAPK特异性抑制剂SB203580共培养卵母细胞,观察卵母细胞生发泡破裂率和成熟率;western-blot检测 SB203580共培养卵母细胞3h和12h的p-P38αMAPK表达情况。  结果:发现P38αMAPK在大鼠卵母细胞GV期,分布于整个细胞包括细胞质和细胞核中,但主要集中于细胞核周围;在大鼠卵母细胞MⅠ期,P38αMAPK在纺锤体区域分布相对较少。p-MK2在大鼠卵母细胞GV期定位细胞质中,主要集中于细胞核周围;在MⅠ期p-MK2,主要集中在纺锤体和核周围。p-P38αMAPK在大鼠卵母细胞减数分裂GV期定位于细胞质,主要在细胞核周聚集,细胞核中未见表达;GVBD期,p-P38αMAPK均匀的分布于细胞质中;MⅠ期,p-P38αMAPK主要分布于纺锤体周围;AⅠ-TⅠ期,p-P38αMAPK分布逐渐趋向两极,围绕着核分布;MⅡ期,p-P38αMAPK重新围绕着纺锤体分布。Western-blot检测发现,p-P38αMAPK在GV期开始有表达,在MⅠ和MⅡ期表达量最高;SB203580共培养卵母细胞3h和12h发现:实验组培养3h,GVBD发生率为58.8±0.6%,而对照组GVBD发生率为82.5±1.6%,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组培养12h,MⅡ发生率为40.1±3.1%,而对照组为73.3±3.7%,差异具有统计学意义(P<0.05);western-blot检测发现SB203580共培养3h和12h的大鼠卵母细胞实验组p-P38αMAPK表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:P38αMAPK在大鼠卵母细胞减数分裂过程中可能起着重要的作用,可以促进卵母细胞成熟。
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