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背景：喘可治注射液为国家二类新药,由淫羊藿及巴戟天组成,具有温和补肾,平喘止咳和抗过敏、增强体液免疫与细胞免疫的作用,且毒副反应小,药用机理明确,临床应用前景广阔。本研究选择喘可治注射液中主要的4种黄酮成分朝藿定A、B、C及淫羊藿苷,进行质量评价及药物动力学研究。采用高效液相色谱-串联质谱法快速、准确测定喘可治注射液中朝藿定A,B,C及淫羊藿苷这4种黄酮苷的含量,进行质量评价研究,结合已有的色谱指纹图谱可为喘可治注射液提供更加完备可靠的质量控制手段；通过建立的淫羊藿主要成分体内分析方法探讨喘可治注射液的药物动力学特征；给予朝藿定C单体、四种黄酮组合物及喘可治注射液三种不同方式中朝藿定C药动学特征的差异。目的：1建立同时测定朝藿定A、B、C及淫羊藿苷的液相色谱-质谱联用(LC/MS/MS)法,考察15批喘可治注射液中各成分含量的稳定性及是否符合国家药典标准。2建立生物样品中朝藿定A、B、C及淫羊藿苷的多成分同时测定方法,研究喘可治注射液中4种淫羊藿黄酮成分的药动学特征。3运用建立的淫羊藿黄酮多成分体内分析方法,比较肌肉注射给予朝藿定C单体、四种黄酮组合物及喘可治注射液后朝藿定C的体内药动学差异,考察配伍组合对喘可治注射液中所含主要黄酮成分体内过程的影响。方法：1朝藿定A、B、C及淫羊藿苷含量测定方法学的建立：采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(150×2.1mm,5.0μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)为流动相进行色谱分离,流速0.22ml·min-1,柱温40-C；在负离子检测模式下采用多反应监控(MRM),以柚皮苷为内标进行测定。15批喘可治注射液用流动相稀释2000倍后,运用建立的朝藿定A、B、C及淫羊藿苷含量测定方法对其进行测定。2大鼠血浆样品中朝藿定A、B、C及淫羊藿苷血药浓度的测定及体内药物动力学研究：配置系列血浆标准曲线样品,采用安捷伦固相萃取小柱进行固相萃取法处理血浆样品,运用上述色谱及质谱条件进行测定。大鼠肌肉注射低、中、高剂量喘可治注射液,眼底静脉丛采得各相应时间点的全血,高速离心得到血浆,采用SPE法对血浆样品进行前处理,LC/MS/MS分析检测,应用DAS2.0软件计算药物动力学参数。3配伍组合对喘可治注射液中所含主要黄酮成分体内过程的影响：采用朝藿定A、B、C及淫羊藿苷标准品配置等同于喘可治注射液中朝藿定A、B、C及淫羊藿苷实际浓度的混合对照品溶液及朝藿定C对照品溶液。大鼠18只,随机分为3组,每组6只,其中一组肌肉注射朝藿定C溶液,一组肌肉注射喘可治注射液,另一组肌肉注射混合黄酮组合物溶液,按照相应时间点采集每只大鼠的全血,高速离心得到血浆,LC/MS/MS进行检测。全部数据用DAS2.0软件处理得到药动学参数,比较两组大鼠的药动学参数差异。结果：1喘可治注射液中4中黄酮成分的含量测定：朝藿定A,B,C和淫羊藿苷四种成分的定量限均为0.04ng·mL-1、检测限均为0.05ng·mL-1。四种黄酮成分在1.0-1000.0ng·mL-1呈现良好的线性关系(r>0.9950),加样回收率在90.11%-100.3%之间,RSD<2.89%(n=6),方法重复性、稳定性及精密度良好,四种黄酮苷在15批喘可治注射液中的含量比较稳定,且符合国家食品药品监督管理局国家药品标准要求。2朝藿定A、B、C及淫羊藿苷血药浓度的测定及体内药物动力学研究：朝藿定A、B、C及淫羊藿苷4种成分在1-1000ng·mL-1范围内,线性关系良好,相关系数均高于0.996；基质效应在90.71%-104.77%之间；日内精密度RSD<5.99,准确度在96.9-107.5之间,日间精密度RSD<10.16,准确度在92.3-105.0之间。大鼠肌肉注射给予0.17、0.50、1.51ml/kg三个剂量喘可治注射液后,Cmax和AUCo_∞随着给药剂量的升高而增加,Tmax无明显变化。3配伍组合对喘可治注射液中所含主要黄酮成分体内过程的影响：比较同一给药途径下单独给予朝藿定C、黄酮组合物以及喘可治注射液后三组大鼠平均药-时曲线及药代动力学参数,可以发现喘可治注射液和四种黄酮组合物相比朝藿定C单独给药CLz、MRT0-∞和AUC0-∞值有明显差异,以组合物和制剂给药时其CLz下降,MRTo_∞明显延长,而AUC0-∞值显著增大。结论：1所建立的液质联用定量方法灵敏、准确、稳定,适用于喘可治注射液四种主要黄酮苷的快速测定,可用于喘可治注射液的质量控制。研究检测了15批喘可治注射液,结果显示四种黄酮苷在15批注射液中的含量比较稳定,且每批所含的朝藿定C与淫羊藿苷的总量均在国家药品标准规定的喘可治注射液每1mL含朝藿定C与淫羊藿苷的总量在0.50-1.00mg的范围内。2建立喘可治注射液主要黄酮类成朝藿定A、B、C及淫羊藿苷的体内定量分析方法,方法准确、特异、快速,适宜用于鼠血浆中这4种黄酮成分的定量检测。大鼠肌肉注射给予喘可治注射液后,达峰迅速,且呈现双峰或多峰现象。朝藿定A、B、C及淫羊藿苷半衰期均在半小时左右。3比较同一给药途径下单独给予朝藿定C、黄酮组合物以及喘可治注射液后三组大鼠平均药-时曲线及药代动力学参数,考察配伍组合对喘可治注射液的主要黄酮成分朝藿定C成分体内过程的影响。结果表明,以喘可治注射液和黄酮组合物形式给药时,大鼠体内朝藿定C的吸收显著增加、药物在体内的驻留时间延长。