实时荧光PCR检测食品肉类种源方法研究

被引量 : 0次 | 上传用户:qx552801
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】利用Taqman实时荧光PCR技术,建立猪、牛、羊、鸡和鸭肉种源定性检测体系,以鉴别相关食品肉源成分并鉴定食品标签的真伪;在准确定性基础上,建立猪和鸡源性食品相对定量体系,以甄别猪和鸡肉类食品的轻微污染与故意掺假,并确定其掺杂掺假比例,为肉类食品安全监督与执法提供技术手段。【方法】1.食品中肉类种源定性检测研究:以线粒体细胞色素b基因为扩增靶基因设计合成猪、牛、羊、鸡和鸭肉五种肉源的特异性引物、探针,利用非目标肉类DNA模板检测引物和探针的特异性,以10倍浓度稀释的特异种源肉DNA模板检验方法的灵敏度;自制模拟混合肉类样品,检测抗干扰能力及检测限;并通过市售食品的检测,验证食品肉类种源定性检测体系的应用能力。2.食品中肉类种源相对定量检测研究:分别以猪、鸡单拷贝基因为扩增靶基因设计合成猪、鸡源的引物、探针,利用非目标肉类模板检测引物、探针的特异性,自制含目标肉的模拟肉类混合样品测定体系的检测限和抗干扰能力;制备猪源、鸡源和肉类通用基因的重组质粒以构建外标准曲线,通过测定未知样品中猪源和鸡源Ct值和肉类通用基因Ct值求得各自拷贝数,以目的种源肉拷贝数与通用基因拷贝数的比值为参照判断肉制品是否故意掺假以及掺假程度;利用自制模拟加工混合肉样和市售食品检测所建立体系的应用能力。【结果】1.食品中肉类种源定性检测研究:(1)所设计的五种引物探针,其扩增目的片度长度为88-110bp。各种源体系与非目标肉类无交叉扩增,特异性好,可达到的灵敏度范围为1-7pgDNA。(2)通过模拟混合肉样检测,证实该五种检测体系抗干扰能力高,检测限低,可低至1%(w/w)。(3)通过市售食品的检测,证实对于不同加工处理的肉制品,所建立定性体系皆可准确检测目的种源肉。2.食品中肉类种源相对定量检测研究:(1)所设计的猪源、鸡源引物探针,其扩增目的片度长度为分别为91bp、110bp。各种源体系与非目标肉类无交叉扩增,特异性好;通过模拟混合肉样检测,抗干扰能力高,检测限为1%(w/w)。(2)利用重组质粒构建外标准曲线,肉类通用基因标准曲线方程为Y=-3.0066x+37.8346,R2=0.9987;猪源标准曲线方程为Y=-3.2611x+41.0013,R2=0.9993;鸡源标准曲线方程为Y=-3.1247X+43.1488,R2=0.9996。(3)通过模拟加工混合肉样的检测,目标肉类掺加量分别为5%、30%和50%的混合样品经定量体系检测所得掺假量分别为11.03%、32.55%和53.24%;市售食品的定量结果也与实际结果相近,证实该定量体系可以用来甄别污染与故意掺假以及衡量掺假程度。【结论】1.肉类种源的定性检测研究表明,所建立的体系特异性好,灵敏度高,市场应用能力强,可满足对于不同市售食品中目标肉类和非目标掺假肉类的定性检测需要,可用于鉴别相关食品肉源成分并鉴定食品标签的真伪。2.食品肉类种源的定量检测研究显示,针对单拷贝基因所设计的引物探针体系特异性高,能满足定量检测要求。通过构建重组质粒建立外标准曲线,算得所检测样品中目的种源拷贝数与通用拷贝数比值,可以衡量肉制品中目的种源肉所占比例,并可鉴别含多种肉类食品中高价肉与低价肉的含量是否主次颠倒,确定其掺杂掺假肉类比例。3.本课题通过建立食品肉种源的定性和相对定量检测体系,可准确检测市售肉制品中肉类种源性,甄别肉制品中未标注肉类(猪肉、鸡肉)是否为故意掺假,并衡量其掺假程度。
其他文献
世界上的许多大跨度斜拉桥存在索-桥耦合振动现象,该现象对拉索使用寿命和桥梁的安全运营有着重要影响。由于索-桥耦合振动现象涉及到斜拉桥索与桥面或桥塔的耦合振动,相比直
在自然经济和传统文化层面上,诚信是道德文化的核心,强调的是内在品德修养,追求的是人格高尚,境界崇高。当时,自给自足是基本生存方式,市场交往不发达,诚信更多停留在“自省
儿童学习两种语言意味着他们必须把具有同样意义的内容与两种语言中具有不同语音的单词、句法联系起来。双语学习能促进儿童的单词意识、语音意识和句法意识等元语言意识的发
1.起跨腿发力时机不当,起跨角度偏大起跨腿蹬伸的方向取决于蹬地角的大小,为了获得较大的水平速度,起跨角在68°左右为宜,一般不超过70°。要想控制好起跨角就要把握好发力时机,发
亚里士多德的四因说和潜能现实说、圣经的创世说和赎罪说、古典政治经济学的劳动价值论、黑格尔的劳动哲学、欧文的劳动主义思想,是现代西方劳动哲学的五大思想资源.诞生于现
云计算系统目前面临很多安全威胁,其中很重要的一个安全问题就是网络安全问题。但是由于云平台的庞大和复杂性,很难对云计算系统的安全有一个整体宏观的认识和掌控。因此在云
当代民族关系是我国民族学研究领域的重要方面,也是当今世界热点问题之一。在我国民族关系研究中,信仰伊斯兰教的穆斯林民族与汉族之间的民族关系研究,尤其受到学者们的重视
随着水资源变得越来越稀少及其成本的不断上升,不久的将来,在沙漠、干旱或多年冻土地区开采加工原料煤将十分必要。在这些地区高效率的干选技术将使经济选矿或其他流程成为可
会议