CD40是肿瘤坏死因子超家族成员，为分子量48kD的糖蛋白。CD40在多种肿瘤细胞和某些正常细胞（如单核细胞、内皮细胞等）呈阳性表达。CD40参与机体的免疫反应，在体液免疫和宿主反应方面发挥重要作用。研究表明CD40与其相应配体CD40 L（CD154）结合可对数种体外培养的癌细胞发挥直接生长抑制作用，细胞周期阻滞和/或凋亡诱导作用抑制是CD40和其相应配体相互作用抑制细胞生长的可能机理。但目前，有关CD40-CD40L相互作用在实体肿瘤中的生物学作用尚不明了。　　 COX-2是近年来肿瘤研究领域的热点分子.肿瘤细胞和间质细胞COX-2的表达可促进肿瘤血管形成.某些肿瘤组织中COX-2表达与VEGF水平和微血管密度密切相关。　　 近期研究发现，体外培养单核细胞、纤维母细胞和内皮细胞中CD40/CD40L相互作用可诱导COX-2的表达。可溶性CD40L皮下注射可以诱导小鼠血管形成。但有关实体肿瘤中CD40L/CD40系统和COX-2表达的可能关系尚不明了。　　 目前，国内外文献中有关恶性肿瘤细胞COX-2表达及其临床病理意义的研究很多，但涉及CD40的研究甚少。有关食管鳞状细胞癌中CD40表达及其与COX-2表达的可能关系的研究尚未见文献报道。　　 目的：本研究拟采用免疫组化方法对比观察CD40、COX-2在正常食管鳞状上皮和食管鳞状细胞癌组织以及体外培养正常食管鳞状上皮细胞和食管鳞状细胞癌细胞（Eca109）表达情况，探讨CD40和COX-2在食管鳞状细胞癌发生发展中的可能作用及其相互关系。　　 方法：　　 1.病例及细胞资料　　 选取2001-2006年河北医科大学第二医院和磁县县医院手术切除食管鳞癌79例，由病理科高年资医师复查所有病例全部切片，按照WHO（2002）消化系统肿瘤病理学和遗传学中食管鳞状细胞癌分类标准复核明确诊断食管鳞状细胞癌的诊断，同时选择病变典型、无明显出血坏死的原发癌组织蜡块进行免疫组化研究。食管鳞状细胞癌长度划分采用我国食管鳞状细胞癌分期标准（阳泉）以同期食管鳞状细胞癌或贲门癌手术切除的食管鳞状细胞癌残端组织中28例正常食管鳞状上皮粘膜作为对照。食管鳞状上皮取自河北医科大学第四医院2008年6月-2008年11月食管鳞状细胞癌手术标本5例，食管鳞状细胞癌细胞株Eca109购自中国医学科学院。　　 2.食管鳞状细胞癌CD40、COX-2表达的免疫组织化学检测及临床病理意义分析　　 采用PowerVisionTM免疫组化染色方法研究28例正常食管鳞状上皮和79例食管鳞状细胞癌组织中CD40、COX-2表达情况，并分析CD40、COX-2表达与患者临床病理资料的关系以及二者在食管鳞状细胞癌组织中表达的相关性。　　 3.原代培养食管鳞状上皮和Eca109细胞CD40表达免疫细胞化学检测　　 将病理组织学观察证实的食管鳞状细胞癌肿瘤边缘3厘米以外的食管粘膜上皮组织进行原代培养、爬片。以免疫细胞化学方法分析检测食管鳞状上皮原代培养细胞以及Eca109细胞株CD40表达情况。　　 4.原代培养食管鳞状上皮和Eca109细胞CD40、COX-2表达的免疫印迹（Western blotting）分析　　 收集指数生长期培养细胞，提取细胞总蛋白，用蛋白印迹方法检测食管鳞状上皮原代培养细胞及Eca109细胞株CD40、COX-2表达情况。　　 5.统计处理：所得数据运用x2检验、t检验及Fisher确切概率进行统计处理。　　 结果：　　 1、CD40和COX-2蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达情况　　 1.1食管鳞状细胞癌组织CD40阳性表达及其临床病理意义　　 CD40阳性染色位于细胞膜或细胞浆。79例食管鳞状细胞癌组织中CD40蛋白呈阳性表达者43例，阳性表达率达到54.43％，明显高于癌旁正常食管组织的表达（10.71％，p<0.05）。　　 食管鳞状细胞癌中CD40表达与肿瘤大小、部位、分化程度无关，但与淋巴结转移密切相关，伴有淋巴结转移病例癌组织CD40阳性表达明显高于无淋巴结转移者（p<0.05）。　　 1.2食管鳞状细胞癌组织COX-2阳性表达及其临床病理意义　　 COX-2蛋白主要表达在肿瘤细胞的胞质和胞膜。正常食管鳞状上皮COX-2阳性表达率为17.8％，而在食管鳞状细胞癌中其阳性表达率达到69.62％，明显高于正常食管粘膜上皮（P<0.05）。　　 COX-2在食管鳞状细胞癌中的阳性表达与食管鳞状细胞癌患者性别、年龄及肿瘤大小、部位、分化程度、有无淋巴结转移等均无明显相关（p>0.05）。　　 1.3食管鳞状细胞癌组织CD40和COX-2表达的相关关系　　 统计结果表明，CD40阳性表达的43例食管鳞状细胞癌病例中有38例COX-2呈阳性表达，而CD40阴性的36例中19例表现为COX-2阴性表达，CD40与COX-2在食管鳞状细胞癌组织中表达呈正相关（p<0.05）。　　 2、原代培养食管鳞状上皮细胞和Eca109食管鳞状细胞癌细胞株CD40、COX-2的表达情况　　 2.1 CD40表达的免疫细胞化学检查结果　　 食管鳞状上皮原代培养细胞未见CD40蛋白着色，而食管鳞状细胞癌细胞株Eca109 CD40蛋白表达阳性。　　 2.2 CD40和COX-2表达的Western Blot检测结果　　 Western Blot检测结果表明， CD40和COX-2分别在44kD和70kD位置出现条带，以GAPDH（38kD）为内参照，结果显示ECA109细胞株CD40与COX-2表达均比正常食管上皮细胞明显增高。　　 结论：　　 1、CD40在食管鳞状细胞癌组织中的表达阳性率明显高于正常食管鳞状上皮，食管鳞状细胞癌组织CD40蛋白表达与无淋巴结转移密切相关。　　 2、食管鳞状细胞癌组织COX-2阳性表达率明显高于正常食管鳞状上皮。食管鳞状细胞癌组织COX-2表达与临床病理特征未见明显关系。　　 3、食管鳞状细胞癌组织中CD40与COX-2表达呈正相关。　　 4、食管鳞状细胞癌细胞株Eca109细胞CD40及COX-2表达均比正常食管上皮细胞明显增高。　　 5、CD40和COX-2可能与食管鳞状细胞癌的发生发展密切相关。