【目的】1、探索在结直肠癌HCT116细胞中,Kiss‐1基因对Rac1、Rac1‐GTP蛋白表达的影响。2、探索Kiss‐1基因抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、侵袭及迁移能力是否与Rac1途径有关。【方法】1、通过构建慢病毒包装的Kiss‐1过表达载体感染人结直肠癌HCT116细胞,获得稳定过表达Kiss‐1的细胞株。采用RT‐PCR和免疫印迹法分别检测Kiss‐1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达情况,从而判断Kiss‐1在空白对照组、阴性对照组、Kiss‐1过表达组细胞中是否能够稳定表达。2、通过免疫印迹法检测空白对照组、阴性对照组及Kiss‐1过表达组细胞Rac1及Rac1活化状态蛋白(Rac1‐GTP)的表达水平,从而判断Kiss‐1基因对Rac1、Rac1‐GTP蛋白表达的影响。3、用Rac1激动剂PDGF处理Kiss‐1过表达细胞株。免疫印迹法检测空白对照组、阴性对照组、Kiss‐1过表达组及Kiss‐1过表达+Rac1激动剂组细胞中Rac1‐GTP的表达水平,并采用CCK‐8法和Transwell小室分别检测以上四组细胞的增殖及侵袭迁移能力。【结果】1、慢病毒包装的Kiss‐1过表达载体成功转染HCT116细胞后,Kiss‐1在mRNA和蛋白水平的表达均明显升高,Kiss‐1在细胞中能够稳定过表达。2、免疫印迹检测结果显示,Kiss‐1过表达组细胞Rac1活性蛋白(Rac1‐GTP)的表达水平与空白对照组和阴性对照组相比明显较低,而Rac1蛋白的表达水平各组之间无明显差异。3、Kiss‐1过表达组细胞株用Rac1激动剂PDGF处理后,Rac1‐GTP(Rac1活性蛋白)的表达水平明显升高,CCK‐8法检测结果显示,与空白对照组和阴性对照组相比,Kiss‐1过表达组细胞在各个时间点的增殖活力明显较低,差异有统计学意义(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组之间无明显差别;Transwell小室侵袭迁移实验结果表明,Kiss‐1过表达后,细胞的侵袭迁移能力明显减弱(P<0.05)。Kiss‐1过表达组细胞用Rac1激动剂处理后,细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),细胞的侵袭迁移能力亦明显增强(P<0.05)。【结论】Kiss‐1基因抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能与Rac1途径有关,可能通过降低Rac1的活性而发挥作用。