甘露醇、山梨醇增强拮抗酵母菌耐受性及生防效力的研究

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本研究的目的是确定糖醇(甘露醇或山梨醇)对拮抗酵母菌Debaryomyces hansenii的抗逆性和生物防治效力的影响。其中包含:测定拮抗酵母菌D.hansenii在不同逆境(氧化、高温,盐)条件下的存活率;利用甘露醇或山梨醇预处理酵母细胞,随后暴露于高温,氧化(H2O2)胁迫下的细胞存活率;甘露醇或山梨醇对酵母细胞D.hansenii中抗氧化酶的诱导作用,其中包括过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD);定量RT-q PCR测定甘露醇或山梨醇预处理对D.hansenii抗氧化基因表达量的影响,以及在苹果伤口和体外p H 4.0的酵母蛋白胨葡萄糖培养基(YPD)中酵母细胞的种群动态;D.hansenii预处理细胞对苹果的青霉病和灰霉病的生防效果。研究结果表明,与没有预处理的对照组酵母细胞相比,0.1 M甘露醇或0.1 M山梨醇预处理增强了D.hansenii对随后的氧化和高温胁迫的耐受性。当酵母细胞暴露于随后的氧化逆境(30 m M H2O2)或高温逆境(40.5oC)30 min,与未预处理的对照组酵母细胞相比,甘露醇或山梨醇预处理后的酵母细胞表现出更低的细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)积累。相对于没有预处理的对照组酵母细胞,当暴露于随后的氧化逆境(30 m M H2O2)或高温逆境(40.5oC)30min时,预处理的酵母细胞具有更高的酶活性(CAT和SOD)以及过氧化氢酶基因和超氧化物歧化酶基因表达上调。所有D.hansenii都在果实伤口和体外p H4.0 YPD培养基中快速繁殖。在1至4天,预处理酵母细胞的种群数量明显高于未处理酵母细胞的数量。体外生长试验还表明,在最初的48 h内,经过预处理的D.hansenii酵母细胞在p H 4.0(p H值近似富士苹果果肉的p H)的YPD培养基中生长繁殖速度更快。拮抗酵母菌D.hansenii分别显著降低了扩展青霉(Penicillium expansum)和灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的苹果青霉病和灰霉病的发病率和病斑直径。重要的是,与未预处理的酵母细胞相比,甘露醇或山梨醇预处理的酵母细胞在苹果果实上由P.expansum和B.cinerea引起的病斑直径明显减小。相对于对照组的100%病害发病率,未处理的酵母细胞组的发病率降低了约40%。同时,甘露醇或山梨醇预处理的酵母细胞群的发病率降低了约60%。可以看出D.hansenii对病原菌的生物防治非常显著。就病害的发病率和病斑直径而言,预处理的酵母细胞显示出比未处理的酵母细胞更好的防治效果。
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