高性能磁性SERS基底的制备及免疫层析应用研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yifanjiawei
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准确、快速的检测C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)和血清淀粉样蛋白A(SAA)等常见的炎症标志物对临床上感染性疾病的早期诊断、实时监测和预后治疗等至关重要。因此,本研究提出了一种新型的基于表面增强拉曼散射(SERS)的侧流免疫层析(LFA)分析方法,利用Fe3O4@Au磁性颗粒(MNPs)制备多功能化的SERS标签对多种炎症生物标志物进行超敏、定量分析。主要研究内容如下:1、利用“PEI介导的种子生长法”制备粒径均一、分散性好、磁响应性强、SERS增强性能强的Fe3O4@Au磁性颗粒。通过TEM、SEM、XRD、UV-vis、Zeta potential等对制备的金壳磁性颗粒进行了系统的表征及研究。利用拉曼信号分子DTNB对金壳磁性颗粒的SERS性能进行了测试。2、根据Fe3O4@Au磁性颗粒与炎症标志物特异性抗体形成的SERS标签,建立了新型免疫层析检测方法。首先确认了15μg的检测抗体量为修饰SERS标签的最适用量,随后对影响免疫层析性能的相关条件进行优化。实验结果证明1%PBST+1%BSA+10%FBS成分的上样液,CN95型号的NC膜为最佳检测条件。3、Fe3O4@Au MNPs作为分离工具,可用于从复杂样本中磁富集目标炎症标志物,并作为磁性SERS标签,定量检测免疫层析条带上的目标物。因此,我们利用基于Fe3O4@Au SERS标签的免疫层析法分别对CRP、IL-6和PCT进行定量分析。CRP检测的可视化结果为0.5 ng/mL,SERS检测结果为0.05 ng/mL;IL-6检测的可视化结果为0.1 ng/mL,SERS检测结果为0.005 ng/mL;PCT检测的可视化结果为1 ng/mL,SERS检测结果为0.05 ng/mL。该方法对三种炎症标志物的单通道检测展现出较高的灵敏度,具有实际应用的可行性。4、基于免疫层析试纸条的多通道检测能力,我们利用Fe3O4@Au SERS标签实现了在同一纸条上定量分析未经处理血液样本中的两种目标炎症标志物。SAA和CRP的SERS检测限分别为0.1 ng/mL和0.01 ng/mL。灵敏度分别比标准胶体金免疫层析法高100倍和1000倍,比商业化ELISA试剂盒的结果高10倍和100倍。该磁性SERS免疫层析分析法对复杂样本也表现出良好的稳定性、特异性和选择性,可作为感染性疾病诊断的有效工具。
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