阪崎肠杆菌(Enterbacter sakazakii),是寄生在人和动物肠道内的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌,周身鞭毛、能运动、兼性厌氧。该菌能引起严重的脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症等病症,可感染各年龄段免疫力低下的人群,尤其是新生儿、早产儿及出生时身体条件较差的婴儿,感染后婴儿死亡率高达50%以上,是一种重要的食源性条件致病菌。近年来,国内外越来越多的研究表明:婴幼儿配方奶粉是引起婴幼儿感染的主要传染源和传播媒介。目前,GB法检测阪崎肠杆菌主要是基于传统的微生物培养,然后综合菌落形态、生化特征等进行鉴定。此法操作繁琐、耗时耗力、且不易分辨结果,存在一定假阳性。所以近年来,采用分子生物学的方法检测食源性病菌得到越来越广泛的应用。本论文基于中华人民共和国出入境检验检疫行业标准(SN/T 1632.3-2013)中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)实时荧光定量PCR检验方法,首先将PCR反应各组分预混成Mix Buffer,大大简化了操作步骤,同时对各组分浓度及反应体系进行了优化,实现阪崎肠杆菌Real-time PCR的快速检测。其次,通过对比酚氯仿和加热裂解两种DNA提取方法,对加热裂解法进行了优化,并用贝因美奶粉样本和人工污染样本进行了验证。人工污染奶粉的阪崎肠杆菌的检出限可达4.7× 103CFU/ml。本文中所有实时荧光定量PCR实验都是在博日公司自主研发的实时荧光定量PCR仪器平台和博日专利产品“标准PCR实验室”内完成,从而初步建立了“试剂、仪器、软件、PCR污染防控”为一体的阪崎肠杆菌快速检测系统,为客户提供从硬件到软件,从实验操作到环境污染控制的整体解决方案,实现“稳定”的快速检测。