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NOK/STYK1蛋白是一种新的在结构上比较独特的受体型酪氨酸蛋白激酶家族成员，具有较强的促肿瘤形成及转移的能力，并参与细胞的内吞过程。结构序列分析结果表明在NOK基因的氨基酸序列中存在多处双亮氨酸基序(Di-Leucine Motif)，而研究表明，双亮氨酸基序在细胞的内吞、膜泡运输以及细胞信号分选等过程中具有重要作用。为此，在本研究中我们主要开展了以下两方面的工作。 第一，通过构建一系列NOK蛋白的双亮氨酸基序突变体，并在HeLa细胞中瞬时转染，检测了蛋白表达水平及细胞内分布特征的变化。结果表明，NOK蛋白的不同双亮氨酸基序的突变可以导致NOK蛋白在细胞中表达量的改变。与对照相比，NOKL220P表达量明显提高，而NOKL41P，NOKL203P，NOKL237P， NOKL299P的表达量降低。从NOK蛋白在细胞内的分布特征来看，不同双亮氨酸基序的突变同样会引起NOK蛋白在细胞中的分布特征的改变，包括NOK蛋白形成聚集体的细胞比例、在细胞中的分布位置以及聚集体的大小和数量的不同。特别是NOKL203P、NOK237P以及NOKL299P三个位置的突变可以显著地降低NOK蛋白在细胞中的聚集。不仅如此，过量表达NOKL41P还表现出了更为明显的核膜定位特征，而L220P则表现出了更为明显的质膜定位特征。 第二，分别构建了NOK基因及其不同双亮氨酸基序点突变载体的稳定细胞系，并验证了它们在蛋白表达水平及细胞内分布特征的变化。结果表明，NOK及其双亮氨酸基序点突变载体在稳定细胞系水平的蛋白表达也存在一定的差异，其趋势与瞬时转染的蛋白表达水平基本一致。但在细胞水平的定位方面，稳定细胞系与瞬时转染相比存在明显差异，主要表现在稳定细胞系在细胞水平的定位分布，AP的比例明显减少，并且只在HeLa-NOKL41P-HA和HeLa-NOKL220P-HA中出现了AP分布，而在HeLa-NOK-HA，HeLa-NOKL203P-HA，HeLa-NOKL237P-HA，HeLa-NOKL299P-HA中没有出现AP分布。综上所述，NOK的不同双亮氨酸基序对其蛋白表达水平以及在细胞内的定位分布具有重要的调节作用。因此，本项研究为阐明NOK蛋白促肿瘤形成及转移的分子机理提供了新的见解。