论文部分内容阅读
研究背景和目的：胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。在我国，胃癌的死亡率居恶性肿瘤之首。尽管近年来胃癌的治疗手段不断进步，但是大多数进展期胃癌患者的治疗和预后仍不尽如人意。临床研究发现ω-3多不饱和脂肪酸（Polyunsaturatedfatty acids，PUFAs）能够改善晚期肿瘤患者的恶病质和生活质量，延长肿瘤患者的生存时间，其抗癌作用及其与化疗药物之间的协同作用已经通过体内外试验在某些肿瘤中得到证实，然而，它们的具体分子学机制并不清楚，而且在胃癌方面的研究报导并不多见，能否应用于临床的证据依然不足。因此，本研究旨在探讨ω-3多不饱和脂肪酸在胃癌治疗中的作用机制，为临床应用提供理论依据。方法：将不同浓度DHA、EPA对照用无水乙醇与胃癌细胞培养后，在不同时间点（培养后24h、48h、72h），运用CCK-8测定DHA、EPA对胃癌细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测DHA、EPA对胃癌细胞凋亡和细胞周期的影响。用Western-Blot方法检测对凋亡相关蛋白的影响。运用CCK-8测定不同浓度的顺铂单独或与DHA、EPA联合对胃癌细胞增殖的影响，计算抑制率以及半数抑制浓度（IC50），并运用Chou-Talalay的联合指数（CI）评估顺铂分别与DHA或EPA之间的协同作用。根据前面DHA、EPA抑制胃癌细胞增殖的测定结果，选择合适的浓度，将实验分为对照组、DHA、EPA、顺铂、DHA+顺铂、EPA+顺铂进行抑制率测定，同时运用流式细胞仪检测药物对胃癌细胞凋亡和细胞周期的影响。为了进一步明确ω-3多不饱和脂肪酸在胃癌治疗中的作用机制，通过cDNA微阵列技术筛选ω-3多不饱和脂肪酸诱导胃癌细胞凋亡的相关基因，并选取目的基因，对其进行功能分析。结果：与对照组相比，DHA或EPA均能够抑制胃癌细胞的增殖并具浓度依赖性，但无时间依赖性。DHA、EPA能诱导胃癌细胞凋亡并将细胞阻滞于G0/G1期。Western-Blot显示DHA、EPA能激活Caspase-3、Caspase-8、Bax、Bid，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2。DHA或EPA与顺铂联合应用能够增强顺铂对胃癌细胞MKN45、MKN28的抑制活性，呈浓度依赖性；联合组中顺铂的IC50较单药组低。通过Chou-Talalay的联合指数（CI）测定，发现DHA或EPA与顺铂联合作用于MKN45和MKN28细胞后，DHA+顺铂以及EPA+顺铂对抑制胃癌细胞增殖均存在协同作用。与单药相比，联合用药后胃癌细胞的凋亡率升高、并诱导细胞阻滞于G0/G1期和S期。cDNA微阵列筛选出凋亡相关基因，其中29个基因表达上调，25个基因表达下调。选取上调基因ADORA1作为目的基因，对其功能进行初步研究。首次发现ADORA1在不同胃癌细胞中的表达。在胃癌细胞MKN45中经DHA、EPA作用后，发现ADORA1表达上调。而联合顺铂后ADORA1的表达明显增高。运用ADORA1的拮抗剂（DPCPX）处理后，药物诱导胃癌细胞的凋亡率下降。结论：ω-3多不饱和脂肪酸能够抑制胃癌细胞的增殖和诱导细胞的凋亡。ω-3多不饱和脂肪酸联合顺铂对抑制胃癌细胞生长存在协同作用。ADORA1受体参与了ω-3多不饱和脂肪酸及其协同顺铂诱导胃癌细胞凋亡的过程。